let-7e通過抑制PARP1介導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)增加卵巢癌對(duì)順鉑的敏感性.pdf

1、化療耐藥是導(dǎo)致卵巢癌預(yù)后差的重要原因。鉑類藥物進(jìn)入細(xì)胞后與DNA交聯(lián)導(dǎo)致DNA單鏈和雙鏈損傷，從而觸發(fā)凋亡，而DNA損傷修復(fù)功能增強(qiáng)是導(dǎo)致卵巢癌鉑類耐藥的機(jī)制之一。PARP1在DNA損傷修復(fù)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，且是let-7e的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)上調(diào)let-7e能夠增加卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，本文旨在研究let-7e是否通過抑制PARP1介導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)增加卵巢癌的化療敏感性。方法：原位雜交和免疫組化分別檢測(cè)let-7e和D

2、NA損傷修復(fù)關(guān)鍵蛋白PARP1、BRCA1、Rad51在卵巢癌組織中的表達(dá)。采用MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞的順鉑敏感性。堿性和中性彗星實(shí)驗(yàn)、γH2AX免疫熒光檢測(cè)DNA損傷修復(fù)。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)let-7e是否靶向作用于PARP1的3’UTR端。采用Fisher確切概率法、生存分析、受試者工作曲線（ROC）、cox和logistics回歸模型等統(tǒng)計(jì)方法探討let-7e和PARP1、BRCA1、Rad51的臨床意義。結(jié)果：原

3、位雜交結(jié)果顯示let-7e在化療耐藥組織中低表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了let-7e與化療耐藥相關(guān)。堿性和中性彗星實(shí)驗(yàn)、γH2AX免疫熒光顯示上調(diào)let-7e后，DNA單鏈和雙鏈損傷修復(fù)被抑制，而下調(diào)let-7e，DNA修復(fù)功能則增強(qiáng)；且let-7e能夠負(fù)性調(diào)控雙鏈修復(fù)關(guān)鍵蛋白BRCA1和Rad51的表達(dá)。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)let-7e能夠與PARP1的3’UTR端直接結(jié)合，并抑制其表達(dá)。對(duì)let-7e和PARP1進(jìn)行同向上調(diào)和下調(diào)，發(fā)現(xiàn)le

4、t-7e能夠作用于PARP1抑制DNA單鏈和雙鏈損傷修復(fù),體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)let-7e對(duì)PARP1的靶向調(diào)控最終能夠增加卵巢癌對(duì)順鉑的敏感性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)與PARP1抑制劑類似，let-7e的模擬物agomir能夠增敏順鉑的毒性作用。Fisher確切概率法、Kaplan-meier生存分析，單因素cox和logistics回歸分析顯示let-7e低表達(dá)，PARP1、BRCA1、Rad51高表達(dá)與卵巢癌患者化療耐藥及較差的預(yù)后相關(guān)；ROC