對(duì)一種來(lái)源于軟體動(dòng)物的殼聚糖酶的初步純化.pdf

1、該論文從6036酶降解殼聚糖活性檢測(cè)手段入手,研究了影響酶活性的一系列因素,同時(shí)對(duì)現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行了比較,確定了純化的條件,設(shè)計(jì)出一套合理而可行的實(shí)驗(yàn)方案,對(duì)6036酶進(jìn)行了初步的分離與純化,獲得了以下結(jié)果.1.考察了6036酶活性檢測(cè)方法,最終選擇PAHBAH還原糖測(cè)定方法作為酶活性的測(cè)定方法.2.研究了影響酶活的因素.降解殼聚糖的最佳介質(zhì)為醋酸溶液;底物濃度范圍在0-15g/l時(shí)6036酶酶活隨酶濃度增加而增大;6036酶最適反應(yīng)

2、溫度為40-50℃;反應(yīng)最適pH值為4-5;在金屬離子濃度為0-1M時(shí),一價(jià)K<'+>、Na<'+>離子對(duì)6036酶酶活主要是促進(jìn)作用;而二價(jià)Ca<'2+>離子對(duì)6036酶酶活影響在低于0.25M時(shí)促進(jìn),高于該濃度時(shí)抑制;但Mg<'2+>離子主要起抑制酶活的作用.3.通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)現(xiàn)有的層析填料和層析柱套盒進(jìn)行了篩選,選擇了DEAE-Sepharose,Superose12和HA層析填料作為6036酶初步純化的層析用料.4.設(shè)計(jì)出一套較為合

3、理而有效的純化6036酶的方案,首先采用DEAE-Sepharose離子交換層析,收集活性蛋白質(zhì)峰冷凍干燥后經(jīng)Superose12凝膠過(guò)濾層析除鹽同時(shí)轉(zhuǎn)換緩沖體系,將蛋白質(zhì)峰合并濃縮后上樣至HA層析柱進(jìn)行分離,同時(shí)用電泳檢測(cè)分離與純化效果.分離前后條帶數(shù)目由原來(lái)的25條減少至8條,而比活性則增加了24倍.該論文為完全分離純化6036酶提供了基本實(shí)驗(yàn)方案,為獲得高純度的降解酶打下了前期工作基礎(chǔ).可通過(guò)進(jìn)一步純化酶,以酶蛋白測(cè)定蛋白質(zhì)順序,