ETV5在人臍帶間充質(zhì)干細胞的生物學功能研究.pdf

1、目的：
　　干細胞是一種能夠高度自我增殖、未充分分化不成熟的、具有再生為各種組織器官的細胞，醫(yī)學界稱為“萬用細胞”，隨著醫(yī)學研究不斷深入，干細胞移植治療已經(jīng)成為解決許多疑難雜癥的首要治療方式。人臍帶間充質(zhì)干細胞作為臍帶來源的成體干細胞，具有來源方便、增殖迅速、存活時間長、不受倫理與道德約束等特點，是細胞替代治療的理想來源。我們前期實驗研究了人臍帶間充質(zhì)干細胞向生殖細胞、心肌細胞、神經(jīng)細胞、癌細胞等細胞方向的誘導分化，但是對人臍帶間

2、充質(zhì)干細胞（HUMSCs）本身的分子調(diào)節(jié)機制暫未有具體的研究。ETV5作為ETS家族轉(zhuǎn)錄因子的一員，文獻報道ETV5在精原干細胞中能夠調(diào)控BCL6b、Lhx1、CXCR4的表達及癌細胞中調(diào)控FOXM1的表達而參與細胞增殖、細胞自我更新、腫瘤形成等過程，所以本實驗旨在前期研究的基礎(chǔ)上，通過電轉(zhuǎn)染方式將ETV5 siRNA轉(zhuǎn)染HUMSCs，研究并探討ETV5在HUMSCs的生物學功能及其可能的調(diào)控機制。
　　方法：
　　通過小塊

3、組織貼壁法培養(yǎng)、擴增HUMSCs，取第三代的HUMSCs，消化、計數(shù)后通過電轉(zhuǎn)染方式以每孔4×105細胞加3uM濃度的ETV5干擾RNA（siRNA）將其轉(zhuǎn)染HUMSCs并接種到6孔板中，電轉(zhuǎn)染了ETV5 siRNA的HUMSCs為實驗組，僅單純電處理的 HUMSCs為對照組，培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后顯微鏡下觀察細胞生長融合度、消化計數(shù)并提取RNA，采用qRT-PCR檢測HUMSCs的ETV5 mRNA表達情況；qRT-PCR檢測BCL6b、

4、Lhx1、CXCR4、FOXM1 mRNA的表達情況。
　　結(jié)果：
　　顯微鏡下觀察電轉(zhuǎn)染了ETV5 siRNA的HUMSCs培養(yǎng)48h后細胞生長融合度約65％-70%，細胞計數(shù)平均約8×105，對照組顯微鏡下觀察細胞生長融合度約80%-85%，細胞計數(shù)平均約10.5×105，差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；qRT-PCR結(jié)果顯示電轉(zhuǎn)染了ETV5 siRNA的HUMSCs培養(yǎng)48h后ETV5 mRNA表達水平較對照組下降

5、，差異具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；同時電轉(zhuǎn)了ETV5 siRNA的HUMSCs較對照組BCL6b、FOXM1 mRNA表達水平下降，而CXCR4、Lhx1 mRNA表達水平升高，差異均具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　⑴HUMSCs通過電轉(zhuǎn)染ETV5 siRNA干擾ETV5表達，能抑制細胞增殖，說明ETV5在HUMSCs中能促進細胞增殖。⑵在HUMSCs中，隨著ETV5 mRNA表達下降，BCL6b、FO