耐低磷轉(zhuǎn)錄因子GmPTF1表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化大豆研究.pdf

1、磷對(duì)于大豆新陳代謝和生長(zhǎng)發(fā)育具有重要作用,缺磷將使大豆?fàn)I養(yǎng)器官生長(zhǎng)受到嚴(yán)重抑制。本研究在已克隆轉(zhuǎn)錄因子GmPTF1基礎(chǔ)上,構(gòu)建基因的真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化擬南芥,研究基因的生物學(xué)功能;同時(shí),利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)與花粉管通道轉(zhuǎn)化技術(shù),將GmPTF1轉(zhuǎn)入不同大豆品種,創(chuàng)制轉(zhuǎn)基因新材料,為培育耐低磷新品種提供重要資源。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.構(gòu)建了轉(zhuǎn)錄因子GmPTF1真核表達(dá)載體:采用植物超表達(dá)載體pGN與無標(biāo)記(Marker-free)

2、表達(dá)載體pX6,構(gòu)建完成轉(zhuǎn)錄因子基因GmPTF1的超表達(dá)載體pGN-GmPTF1和無標(biāo)記表達(dá)載體pX6-GmPTF1。
　　 2.研究了轉(zhuǎn)錄因子GmPTF1在擬南芥中的生物學(xué)功能:利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)技術(shù)將pGN-GmPTF1和pX6-GmPTF1轉(zhuǎn)入擬南芥,獲得了轉(zhuǎn)有pGN-GmPTF1的T2代植株;經(jīng)分析T2代擬南芥與野生型發(fā)現(xiàn),超表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥在低磷脅迫處理下的生長(zhǎng)狀況優(yōu)于野生型,表明GmPTF1具有提高擬南芥耐低磷的作用。<

3、br>　　 3.完成了耐低磷轉(zhuǎn)錄因子GmPTF1轉(zhuǎn)化不同大豆品種:利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)與花粉管通道轉(zhuǎn)化技術(shù),將表達(dá)載體pGN-GmPTF1和pX6-GmPTF1分別轉(zhuǎn)化冀豆12、冀豆16、五星1號(hào)和魯冠豆1號(hào),經(jīng)PCR檢測(cè)獲得了65棵T0,13棵T1(9個(gè)株系),38棵T2(6個(gè)株系)和3棵T3代(2個(gè)株系)陽性植株。
　　 4.獲得了6個(gè)轉(zhuǎn)GmPTF1基因大豆新材料:經(jīng)PCR、RT-PCR與基因測(cè)序分析,證實(shí)耐低磷轉(zhuǎn)錄因子GmPT