日糧蛋白水平對(duì)早期斷奶羔羊生長發(fā)育和肝臟基因表達(dá)的影響.pdf

1、本試驗(yàn)旨在研究日糧蛋白水平對(duì)早期斷奶湖羊羔羊生長發(fā)育及肝臟基因表達(dá)的影響。通過選用雙胞胎羔羊，于15日齡斷奶，采用配對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分別飼喂正常蛋白水平和低蛋白水平日糧至60日齡，61-90日齡之間所有試驗(yàn)羊均飼喂正常蛋白水平開食料。測定羔羊的生長性能、屠宰性能、器官發(fā)育、營養(yǎng)物質(zhì)消化率，獲取早期發(fā)育過程中蛋白水平對(duì)羔羊生長發(fā)育的影響；采用RNA-seq測序方法，從 mRNA水平探究蛋白質(zhì)水平對(duì)羔羊生長發(fā)育的調(diào)控機(jī)制，為推動(dòng)我國幼畜的培育工

2、作提供理論基礎(chǔ)。共包括3個(gè)試驗(yàn)，具體內(nèi)容如下：
　　試驗(yàn)一：日糧蛋白水平對(duì)早期斷奶湖羊公羔生長發(fā)育及肉品質(zhì)的影響
　　本試驗(yàn)旨在研究日糧蛋白水平對(duì)早期斷奶湖羊公羔生長性能、屠宰性能、器官發(fā)育及肉品質(zhì)的影響。試驗(yàn)選取16對(duì)湖羊雙胞胎公羔，采用配對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，分為2個(gè)處理，15日齡斷奶，隨機(jī)選取一組飼喂正常蛋白水平分別為25％的代乳粉及21%的開食料，記為 NPL（normal protein level, NPL）；另一組飼喂等

3、能低蛋白水平的代乳粉（19%）及開食料（15%），記為LPL（low protein level, LPL）。代乳粉飼喂至60日齡，開食料從15日齡開始飼喂，61～90 d NPL組及LPL組羔羊均飼喂正常水平的開食料。分別在60及90日齡隨機(jī)選取4對(duì)羔羊進(jìn)行屠宰，測定相關(guān)指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果表明：60及90日齡時(shí)，LPL組的體重均顯著低于NPL組（P<0.05），采食量差異不顯著（P>0.05）；15~60日齡階段，LPL組的飼料轉(zhuǎn)化率顯著

4、高于NPL組（P<0.05），而61～90日齡LPL組則顯著低于NPL組（P<0.05）；同時(shí)，隨著日齡的增加，羔羊日增重和飼料轉(zhuǎn)化率均增大。60及90日齡時(shí)LPL組的宰前活重、空體重、胴體重、GR值均顯著低于NPL組（P<0.05），但是兩組間屠宰率差異不顯著（P>0.05）。LPL組60日齡時(shí)肝臟和脾臟重量顯著低于NPL組（P<0.05），其余內(nèi)臟器官指數(shù)差異不顯著（P>0.05）；90日齡時(shí)，僅肝臟重量顯著低于 NPL組（P<0.

5、05）；與60日齡相比，90日齡時(shí)所有試驗(yàn)羊的內(nèi)臟器官重量增加，但是占宰前活重的比例基本維持穩(wěn)定。LPL組60日齡的瘤胃和小腸重量均顯著小于NPL組（P<0.05），皺胃的重量及占復(fù)胃比值均顯著的低于NPL組（P<0.05），90日齡時(shí)，LPL組的瘤胃、網(wǎng)胃及小腸重均顯著的低于NPL組（P<0.05）；隨著日齡的增長，瘤胃占復(fù)胃的百分比以及大腸占宰前活重的比均隨著日齡增加而上升，但是皺胃和小腸相應(yīng)比值下降。60日齡時(shí)，LPL組滴水損失、

6、熟肉率及系水力顯著低于NPL組（P<0.05），通過飼喂正常蛋白水平日糧30天，LPL組滴水損失較NPL組高，系水力較NPL組低（P<0.05）；從60到90日齡，肉色a*值增加較大，滴水損失減小，熟肉率和系水力增加。
　　試驗(yàn)二：日糧蛋白水平對(duì)早期斷奶湖羊公羔營養(yǎng)物質(zhì)消化、瘤胃發(fā)酵與血清的影響
　　本試驗(yàn)旨在研究日糧蛋白水平對(duì)早期斷奶湖羊公羔營養(yǎng)物質(zhì)消化代謝、瘤胃發(fā)酵指標(biāo)及血清學(xué)指標(biāo)的影響。試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)處理同試驗(yàn)一。選取

7、4對(duì)雙胞胎羔羊，分別在50-60日齡和80-90日齡測定營養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率，在60和90日齡頸靜脈采血分離血清，測定血糖、血清尿素氮、生長激素和胰島素樣生長因子等指標(biāo)，屠宰取瘤胃液測定氨態(tài)氮及揮發(fā)性脂肪酸。試驗(yàn)結(jié)果表明：50-60日齡階段，LPL組粗蛋白的表觀消化率和氮沉積量顯著低于NPL組（P<0.05），而氮代謝率卻顯著高于NPL組（P<0.05）；80-90日齡階段，LPL組粗脂肪的表觀消化率和氮代謝率顯著高于NPL組（P<0.

8、05）；而隨著日齡的增加，羔羊?qū)DF和ADF的消化率增加，氮代謝率下降。在60日齡時(shí)，NPL組的pH、氨態(tài)氮、乙酸和丙酸占總揮發(fā)酸的比值及乙酸/丙酸均顯著高于LPL組（P<0.05），其余揮發(fā)酸差異不顯著（P>0.05）。飼喂正常蛋白水平日糧30天后，即90日齡時(shí)， NPL組丙酸百分比顯著低于LPL組（P<0.05），而異丁酸和戊酸比例及乙酸/丙酸均顯著高于LPL組（P<0.05），而pH、氨氮和乙酸均差異不顯著（P>0.05）；且9

9、0日齡時(shí)瘤胃液氨態(tài)氮濃度明顯高于60日齡。LPL組60日齡時(shí)血清尿素氮（BUN）濃度和IGF-I水平顯著低于NPL組（P<0.05），而堿性磷酸酶（APL）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性顯著高于NPL組（P<0.05）；90日齡時(shí)，LPL組的ALPL、ALT活性及生長激素（GH）水平顯著高于NPL組（P<0.05）；羔羊日齡的增長對(duì)血清學(xué)指標(biāo)的影響程度不一，BUN隨年齡的增加而明顯增加，GH和IGF-I的水平有下降的趨勢。試驗(yàn)三：日糧蛋白水

10、平對(duì)早期斷奶湖羊公羔肝臟基因表達(dá)的影響
　　本試驗(yàn)旨在研究蛋白水平對(duì)羔羊早期發(fā)育過程中肝臟基因表達(dá)的影響，揭示蛋白水平對(duì)早期斷奶羔羊生長發(fā)育的調(diào)控機(jī)制。試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)處理同試驗(yàn)一。取60日齡（LPL60, NPL60）和90日齡（LPL90, NPL90）各處理組肝臟組織樣品，采用RNA-seq技術(shù)分析不同蛋白水平對(duì)羔羊生長發(fā)育的影響。RNA-seq結(jié)果顯示，從15至60日齡，由于低蛋白水平造成的LPL60組與NPL60組的差異表

11、達(dá)基因(different expression genes, DEGs)為302個(gè)（上調(diào)167個(gè)，下調(diào)135個(gè)），從61至90日齡，前期采食低蛋白日糧的羔羊通過采食正常蛋白水平日糧30 d，LPL90組和NPL90組DEGs為12個(gè)（上調(diào)8個(gè)，下調(diào)4個(gè)）。而隨著日齡和日糧的變化，LPL90與LPL60間的DEGs為2802個(gè)（上調(diào)1186個(gè)，下調(diào)1616個(gè)），NPL90與NPL60間DEGs為8個(gè)（上調(diào)4個(gè)，下調(diào)4個(gè)）。通過基因本體分

12、析（Gene Ontology，GO），LPL60與NPL60相比，血管發(fā)育、細(xì)胞或組織的生長及分化均受到蛋白缺失的顯著調(diào)控（P<0.05）；而LPL90與NPL90相比，無顯著地富集的GO條目（P>0.05）。NPL90與NPL60組之間無顯著富集的GO條目（P>0.05），但是LPL90與LPL60處理組之間細(xì)胞的蛋白代謝或修飾過程，蛋白代謝及修飾過程，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器，細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的蛋白鏈接等均受到顯著地影響（P<0.05）。通過

13、KEGG通路分析表明，LPL60與NPL60在總的DEGs基礎(chǔ)下相比，癌變、細(xì)胞色素P450通路及細(xì)胞因子通路等受到顯著地調(diào)控（P<0.05），進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽、脂類及氨基酸代謝等通路也受到下調(diào) DEGs顯著地影響（P<0.05），而這些通路在LPL90與LPL60比較結(jié)果中均受到上調(diào)DEGs顯著地影響（P<0.05）。而在NPL90和LPL90組之間的結(jié)果顯示差異基因DQA1和DQA2參與了機(jī)體的18條與疾病相關(guān)的通路調(diào)控。