可溶性組織因子及其突變體的基因克隆、表達(dá)和性質(zhì)研究.pdf

1、外源性凝血途徑為人體主要的凝血途徑,血漿中TF的表達(dá)與動(dòng)脈粥樣硬化、膿毒血癥和DIC等許多病理過(guò)程密切相關(guān).因此對(duì)外源性凝血途徑的阻斷調(diào)節(jié),對(duì)這些疾病的預(yù)防與治療有非常重要的臨床意義.我們?cè)谏鲜龉ぷ鞯幕A(chǔ)上研制組織因子突變體,通過(guò)與TF競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合因子VⅡ/VⅡa而達(dá)到抑制外源性凝血途徑的目的.X射線晶體衍射和Alanine Scan證實(shí)TF與因子VⅡ/VⅡa結(jié)合的功能域與協(xié)同催化功能域是相對(duì)獨(dú)立的,因此可以設(shè)計(jì)其突變體,將其協(xié)同催化的功能

2、域通過(guò)突變而失活,保留其與因子VⅡ/VⅡa結(jié)合的功能域.TF突變體可與野生型TF競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合因子VⅡ/VⅡa,從而競(jìng)爭(zhēng)性抑制野生型TF的功能,實(shí)現(xiàn)降低或阻斷外源性凝血途徑的啟動(dòng),達(dá)到防治DIC以及其他以血栓形成為主要病理變化的疾病.根據(jù)上述原理設(shè)計(jì)了兩個(gè)sTF的突變體（MCsTF和MFsTF）,并通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬技術(shù),對(duì)突變體結(jié)構(gòu)的合理性進(jìn)行分析.用PCR的方法,對(duì)sTF cDNA基因進(jìn)行了點(diǎn)突變,序列分析證實(shí)后與原核表達(dá)載體重組,并實(shí)現(xiàn)了在