野生及人工粉被蟲草代謝組差異及活性物質(zhì)研究.pdf

1、蟲草屬于真菌類，具有很好的藥用價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)以粉被蟲草（Cordyceps pruinosa Petch）為研究對(duì)象，分別對(duì)人工培養(yǎng)粉被蟲草孢梗束和菌絲體（菌株RCEF4730）、人工粉被蟲草孢梗束和野生孢梗束進(jìn)行代謝組分析比較，通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)他們的差異代謝物，并成功分離和鑒定了其中的兩種差異標(biāo)記物的分子結(jié)構(gòu)。
　　本實(shí)驗(yàn)利用高效液相-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-DAD-HRMS)，通過(guò)代謝組學(xué)的方法分析粉被蟲草孢梗束與菌

2、絲體的代謝差異，以及孢梗束在人工培養(yǎng)條件下和野外生長(zhǎng)條件下的代謝差異。利用PCA（主成分分析）和OPLS-DA（偏最小二乘法-判別分析）的方法處理數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示:人工孢梗束與菌絲體之間、人工培養(yǎng)的孢梗束和野外條件下產(chǎn)生的孢梗束間均存在顯著的代謝組差異。人工孢梗束與菌絲體的主要差異代謝物有adenine、tabtoxin biosynthesis intermediate6、antibiotic OS1804、carbobenzoxy g

3、lycyl glycyl-L-phenylalanine、N6-(2-hydroxyethyl)adenosine、2,3,5,6,10,14,16-grayanotoxanehepto、hydroxy palmitic acid、antibiotic FD549、curcumin、8-amino-4-methylaconitane-1,3,6,13,14,15,16,18-octol、aphidicolin、PE(18∶0/0∶0)、

4、4-methylaconitane-1,6,8,13,14,16,18-heptol、PC(16∶0/0∶0)、bisparthenolidine、roridin H、PS(21∶0/0∶0)、rhizoxin D等;粉被蟲草人工孢梗束和野生型孢梗束的主要差異代謝物有pseudopelletierine、noformicin、tremetone、shogaols、hydroxy palmitic acid、hydroxy-octadec

5、anoic acid、2-linoleoyl glycerol、dodecanoic acid、jacoline、hydroxy-tetracosanoic acid、4-methylumbelliferyl myo-inositol-1-phosphate、riccardin C、metenaticinC、 PI(16∶0/0∶0)、daunomycin、butanoic acid、nonenoic acid、betaine、urac

6、i、4-O-glucopyranosyl-D-gluconic acid、3'-O-glucopyranoside等。
　　其中，具有很強(qiáng)的抗紫外輻射、抗血小板凝結(jié)和鎮(zhèn)痛等作用的N6-(2-羥乙基)腺苷在人工粉被蟲草孢梗束中的含量高于菌絲體，并且和野生粉被蟲草含量沒(méi)有太大差別;色素分子C30H18O13和C30H18O12等在人工孢梗束中的含量均高于菌絲體和其野生孢梗束，說(shuō)明，在N6-(2-羥乙基)腺苷和天然色素等成分的利用方面，

7、人工培養(yǎng)的粉被蟲草具有較高的利用價(jià)值。
　　通過(guò)HPLC-DAD-HRMS分析發(fā)現(xiàn)，菌株RCEF4730孢梗束和菌絲體的甲醇提取物中含有多種天然色素，主要含有紅色和黃色兩種色素。人工粉被蟲草孢梗束和菌絲體的甲醇提取物還含有一類紫色色素P-2，其分子式是C30H18O14。然后根據(jù)此化合物的分子式和紫外吸收波長(zhǎng)，在Chapman&Hall天然數(shù)據(jù)庫(kù)上查詢，初步認(rèn)為該化合物是一種新的化合物。
　　利用高相液相色譜儀分離得到三種化

8、合物P-1、P-3、P-4的純品，其中P-3、P-4均為羥基蒽醌類色素，P-3呈紅色，P-4呈黃色。經(jīng)LC-HRMS和NMR數(shù)據(jù)解析得知，化合物P-1的分子式為C16H23N3O13,數(shù)據(jù)庫(kù)查詢發(fā)現(xiàn)這是一個(gè)新分子式，因此該化合物為新化合物，具體結(jié)構(gòu)尚在鑒定中;化合物P-3的分子式為C30H18O13，其紫外特征吸收峰分別是225nm、266nm、297nm、503nm，系統(tǒng)學(xué)名為:2，2'，4，4'，5，5'，8-heptahydrox

9、y-7，7'-dimethoxy-1，1'-bianthraquinon;化合物P-4的分子式為C30H18O12，其紫外特征吸收峰分別是225nm、266nm、297nm、467nm，系統(tǒng)學(xué)名為:2，2'，4，4'，5，5'-hexahydroxy-7，7'-dimethoxy-1，1'-bianthraquinone?；衔颬-3具有清除自由基活性，當(dāng)P-3的濃度為0.4g/L時(shí)，對(duì)0.4g/L的DPPH自由基清除率達(dá)到了48.18