表面增強拉曼信號放大生物傳感方法在生物活性分子檢測中的應用.pdf

1、在腫瘤等重大疾病生物檢測方面，蛋白質以及核酸都是非常重要的生物分子標記物，而在疾病早期這些生物分子的含量很低，難以檢測。建立高靈敏高選擇性的生物分子標記物的檢測手段，對于疾病的早期診斷和治療方面將有很大的幫助。本文結合納米金生物條碼放大技術，采用表面增強拉曼技術，構建了雙前體自產生聚合酶剪切循環(huán)、對稱信號放大同時檢測以及不對稱信號放大同時檢測方法，實現了對血小板衍生因子PDGF-BB、癌癥標記物miRNA-203和ATP生物活性分子的高

2、靈敏高選擇性檢測。本工作主要包括以下三個方面：
　　1、根據適體與靶分子特異性識別的特點，本實驗構建了一種基于前體自產生的聚合酶鏈取代放大拉曼信號檢測PDGF-BB的方法，該方法根據PDGF-BB適體的特殊結構，當適體與靶分子結合后，可形成發(fā)夾DNA結構，同時與適體互補的DNA鏈解旋后自動形成另一條發(fā)卡DNA鏈，兩條發(fā)夾DNA的一端以自身為模板，進行聚合酶鏈取代循環(huán)放大反應，釋放大量的單鏈DNA，進而引發(fā)下一步的聚合酶鏈取代循環(huán)放

3、大反應，最后在作為基底的金片上固定了大量的納米金生物條碼，以達到再次放大信號的作用，從而提高檢測的靈敏度，其檢測限為0.42pM。該方法易于操作，具有良好的選擇性和靈敏性，為蛋白質等生物活性小分子的檢測提供了新的思路。
　　2、miRNA-203和ATP是癌癥診斷的重要生物分子，我們設計了一種對稱信號放大同時檢測的方案，通過雜交鏈式反應以及生物條碼技術二次放大檢測信號，制備了一種雙功能生物分子拉曼探針同時檢測miR-203和ATP

4、分子，該方法利用磁珠作為載體，將含有兩種分子識別鏈的DNA鏈及其互補鏈固定在磁珠上，當兩種分子存在時，分別與識別鏈發(fā)生特異性綁定，同時將兩種引發(fā)鏈釋放到體系中，進而引發(fā)下一步的雜交鏈式反應，同時通過堿基互補配對原則將兩種生物條碼大量固定到磁珠上，以金片作為基底檢測拉曼信號，ATP的檢測限為5.6×10-9M，miRNA-203的檢測限為1.2×10-14M。本方案對于兩種分子具有較好的選擇性和靈敏度，為同時檢測多組份提供了可行的檢測方法

5、。
　　3、同時檢測多種重大疾病相關的生物活性分子，可提高疾病早期的檢出率。對于體內濃度差異較大的多組分活性分子，高濃度的分子響應信號易于掩蓋低濃度的分子響應信號，影響低濃度分子檢測的準確性。為進一步提高體內濃度水平差異較大的雙組份檢測的穩(wěn)定性和靈敏度，我們在上一部分的基礎上進行了不對稱同時放大檢測，對于濃度較高的ATP使用生物條碼技術進行一次信號放大，對于濃度較低的miR-203利用雜交鏈式反應反應和生物條碼技術進行二次信號放大