津血源顆粒對(duì)干燥綜合征模型大鼠治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、干燥綜合征(Sj(o)gren'ssyndrome,SS)是一種侵犯涎腺、淚腺等外分泌腺為主的慢性自身免疫性疾病。涎腺的病理改變主要為淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)而臨床出現(xiàn)口干等癥狀,最終可累及全身多系統(tǒng)多器官。血清中有多種自身抗體并伴有高免疫球蛋白血癥。目前為止,尚無(wú)有效治療SS的措施,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)大多采用頻繁飲水、人工唾液等對(duì)癥治療。中醫(yī)在治療干燥綜合征方面發(fā)揮了重要的作用,中藥具有臨床療效好,能顯著改善患者的全身癥狀,提高工作熱情和生活的樂(lè)趣;且病人

2、的依從性好,毒副作用很小。但中藥治療SS的作用靶點(diǎn)和機(jī)制并不明確。
　　 津血源顆粒是江蘇省中醫(yī)院臨床治療SS療效顯著的中藥制劑。為了闡明津血源顆粒治療SS的臨床作用和機(jī)制的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)以及中藥治療SS臨床療效的理論基礎(chǔ),我們從分子到整體水平探索了津血源顆粒對(duì)SS模型動(dòng)物免疫功能的影響,以及津血源顆粒對(duì)水通道蛋白5(AQP5)在唾液腺的分布的作用,同時(shí)觀察了津血源顆粒對(duì)培養(yǎng)的大鼠唾液腺細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。
　　 目的:利

3、用免疫誘導(dǎo)法建立SS大鼠模型,觀察津血源顆粒對(duì)SS模型大鼠的治療作用,檢測(cè)造模后大鼠唾液腺中AQP5的表達(dá);利用原代培養(yǎng)的大鼠頜下腺細(xì)胞觀察津血源顆粒對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。
　　 方法:參照文獻(xiàn)利用免疫誘導(dǎo)法建立SS大鼠模型。Lewis大鼠隨機(jī)分為5組(正常對(duì)照組、佐劑對(duì)照組、模型組、津血源顆粒小劑量組和大劑量組),大鼠頜下腺抗原采用差速離心法制備。模型組和藥物治療組用加入弗氏完全佐劑的頜下腺抗原多點(diǎn)免疫,所有接受不同處理的

4、大鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)間均為21天。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,每隔2天測(cè)定1次大鼠的唾液分泌量;每天測(cè)定大鼠的體重、進(jìn)食量和飲水量。大鼠處死后計(jì)算頜下腺指數(shù)及脾和胸腺免疫器官指數(shù)的變化,HE染色制作頜下腺病理切片;用免疫組化法分析SS大鼠唾液腺AQP5表達(dá)特點(diǎn);離體實(shí)驗(yàn)取材于年輕大鼠頜下腺細(xì)胞,原代培養(yǎng)72h,鈣離子指示劑Fluo-3染色,應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察不同濃度津血源顆粒對(duì)大鼠頜下腺細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。
　　 結(jié)果:1.模型鼠頜下腺

5、HE染色表現(xiàn)為頜下腺出現(xiàn)間質(zhì)、腺管、血管周?chē)馨图?xì)胞浸潤(rùn),導(dǎo)管擴(kuò)張等病變。稱(chēng)取頜下腺重量,計(jì)算頜下腺指數(shù),發(fā)現(xiàn)SS模型大鼠頜下腺指數(shù)較正常組顯著增大。在造模過(guò)程中動(dòng)態(tài)觀察其唾液分泌量的變化,發(fā)現(xiàn)SS模型大鼠從造模第10天起唾液分泌量較正常組明顯減少,一直持續(xù)至造模結(jié)束。說(shuō)明SS模型大鼠口干癥狀明顯。
　　 2.津血源顆?？梢悦黠@減輕模型鼠頜下腺腫脹及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度,降低免疫器官指數(shù),促進(jìn)模型鼠的唾液分泌。通過(guò)對(duì)大鼠體重、攝食和

6、飲水到動(dòng)態(tài)測(cè)定,發(fā)現(xiàn)適當(dāng)劑量的津血源顆粒可以改善SS大鼠的癥狀和體征。
　　 3.正常大鼠頜下腺細(xì)胞膜上存在較多AQP5蛋白。佐劑組大鼠頜下腺細(xì)胞膜上有表達(dá),但數(shù)量較正常組明顯減少;SS模型組腺泡萎縮,殘存腺泡項(xiàng)膜表達(dá)明顯減少甚至消失,與正常組相比有顯著性差異;津血源顆粒組大部分細(xì)胞膜有AQP5蛋白表達(dá),較模型組表達(dá)數(shù)量明顯增多,且分布均勻。
　　 4.Ca2+依賴(lài)的唾液分泌是唾液腺分泌的重要途徑之一,津血源顆粒通過(guò)增加