產(chǎn)酶溶桿菌RNA伴侶蛋白Hfq的鑒定及功能研究.pdf

1、產(chǎn)酶溶桿菌（Lysobacter enzymogenes）是一種新型的生防細(xì)菌。本實(shí)驗(yàn)室從辣椒根際土壤中分離得到一株產(chǎn)酶溶桿菌（Lysobacter enzymogenes）OH11，該菌GC含量較高，有滑行現(xiàn)象，可以產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、纖維素酶、β-1，3-葡聚糖酶在內(nèi)的多種胞外酶。此外，產(chǎn)酶溶桿菌之所以對(duì)許多植物病原菌具有很好的拮抗活性，主要得益于其產(chǎn)生的次生抗菌物質(zhì):一種結(jié)構(gòu)和作用方式全新的廣譜抗真菌卵菌物質(zhì)HSAF(Heat

2、Stable Antifungal Factor)以及抗革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的活性物質(zhì)WAP8294A2，但HSAF和WAP-8294A2生物合成的調(diào)控機(jī)制仍不清楚。Hfq在細(xì)菌中是一種高度保守的RNA伴侶蛋白，參與基因的轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，Hfq有著多樣化的功能例如影響生長(zhǎng)，對(duì)H2O2的耐受能力以及毒性，本研究的目的是在產(chǎn)酶溶桿菌OH11中明確Hfq的功能。
　　本文通過(guò)生物信息學(xué)分析，結(jié)合NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的大腸桿菌和黃單胞科細(xì)菌的基因

3、組信息，從自主測(cè)序的OH11基因組中鑒定了Hfq蛋白。序列分析表明:產(chǎn)酶溶桿菌中Hfq蛋白含有91個(gè)氨基酸，與Escherichia coli str.K-12 substr.MG1655的Hfq蛋白有75％的同源性，與Xanthomonas campestris pv.campestris str.ATCC33913的Hfq蛋白89％同源性。產(chǎn)酶溶桿菌中的hfq基因與大腸桿菌中hfq基因一樣位于miaA-hfq-hflX-hflK-h

4、flC基因簇中。
　　為了研究Hfq在產(chǎn)酶溶桿菌OH11中的功能，我們構(gòu)建了hfq缺失突變菌株以及用基因組無(wú)標(biāo)記替換法構(gòu)建了其互補(bǔ)菌株△hfq(hfq)△αlp。我們發(fā)現(xiàn)hfq缺失突變后，其生長(zhǎng)能力以及對(duì)SDS的耐受能力降低，菌落邊緣變得平滑但不影響表面滑動(dòng)能力，表明hfq參與調(diào)控了細(xì)菌生長(zhǎng)、環(huán)境應(yīng)答及菌落形態(tài)。與野生型相比，hfq突變體合成HSAF和WAP-8294A2的能力顯著增加，對(duì)水稻紋枯病菌Rhizoctonia sol