Ⅰ組mGluR在氟砷聯(lián)合染毒致海馬神經(jīng)元突觸可塑性損傷中的調(diào)控作用.pdf

1、目的：本研究探討氟砷聯(lián)合染毒對(duì)原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元生長、突觸可塑性的影響，從Ⅰ組代謝型谷氨酸受體蛋白表達(dá)水平探討氟砷聯(lián)合暴露損害學(xué)習(xí)記憶的分子機(jī)制，為地方性氟砷聯(lián)合中毒的防治提供理論依據(jù)。
　　方法：1原代培養(yǎng)的新生 SD大鼠海馬神經(jīng)元分別暴露于0.00、0.10、0.20、0.40、0.80μg/ml氟化鈉和0.00、0.05、0.10、0.20、0.40μg/ml亞砷酸鈉，染毒24h。采用倒置顯微鏡和掃描電鏡觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)變

2、化，CCK8檢測試劑盒檢測細(xì)胞活性，LDH檢測試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的乳酸脫氫酶（lactate dehydrtogenase，LDH）活力，Annexin V-FITC凋亡檢測試劑盒檢測細(xì)胞凋亡率，Western-blot方法檢測海馬神經(jīng)元中SYN和GAP-43蛋白的表達(dá)水平。2原代培養(yǎng)的新生 SD大鼠海馬神經(jīng)元在氟砷聯(lián)合染毒（0.40μg/ml氟化鈉+0.10μg/ml亞砷酸鈉）的同時(shí)分別給予三種谷氨酸受體抑制劑 D-AP5（N

3、MDAR抑制劑）、LY367385（mGluR1抑制劑）、MPEP（mGluR5抑制劑）進(jìn)行干預(yù)，作用24h。采用 CCK8檢測試劑盒檢測細(xì)胞活性，Western-blot方法檢測海馬神經(jīng)元中NR2B、mGluR1α、mGluR5及突觸相關(guān)蛋白SYN、GAP-43的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、氟染毒組和砷染毒組大鼠原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的細(xì)胞存活率、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)豐富型神經(jīng)元的構(gòu)成比隨著氟化鈉和亞砷酸鈉染毒濃度的增加而逐漸降低。2、氟染毒

4、組和砷染毒組大鼠原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的LDH活力隨著氟化鈉和亞砷酸鈉染毒濃度的增加而逐漸升高。3、氟染毒組大鼠原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元中 SYN蛋白的表達(dá)水平隨著氟化鈉染毒濃度的增加先升高后降低；而GAP-43蛋白的表達(dá)水平隨著氟化鈉染毒濃度的增加逐漸降低。4、砷染毒組大鼠原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元中 SYN和GAP-43蛋白的表達(dá)水平隨著亞砷酸鈉染毒濃度的增加而逐漸降低。5、與空白對(duì)照組比較，氟砷聯(lián)合染毒組和不同濃度的三

5、種谷氨酸受體抑制劑組（D-AP5組、LY367385組、MPEP組）大鼠原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的細(xì)胞存活率和相應(yīng)谷氨酸受體蛋白（NR2B、mGluR1α、mGluR5）的表達(dá)水平均顯著下降（P＜0.05）；與氟砷聯(lián)合染毒組比較，不同濃度的三種谷氨酸受體抑制劑組大鼠原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的細(xì)胞存活率和相應(yīng)谷氨酸受體蛋白（NR2B、mGluR1α、mGluR5）的表達(dá)水平升高（P＜0.05）。且隨著谷氨酸受體抑制劑濃度的增加細(xì)胞存活率和相應(yīng)蛋白表達(dá)

6、水平依次升高。6、與空白對(duì)照組比較，氟砷聯(lián)合染毒組、50μM D-AP5組、25μMLY367385組、20μMMPEP組海馬神經(jīng)元中SYN和GAP-43的蛋白表達(dá)水平均顯著下降（P＜0.01）；與氟砷聯(lián)合染毒組比較，50μM D-AP5組、25μMLY367385組、20μMMPEP組海馬神經(jīng)元中SYN和GAP-43的蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1、氟、砷染毒可降低原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的生存活性、LDH活力