西地那非對大鼠先天性膈疝模型胎肺發(fā)育的影響及其作用機制的探討.pdf

1、本實驗?zāi)康氖峭ㄟ^研究 HIF-2α、VEGF-A在先天性膈疝大鼠動物模型胎肺中表達的變化，探討產(chǎn)前西地那非干預(yù)對先天性膈疝大鼠動物模型胎肺肺血管、肺泡等發(fā)育的影響及其可能的作用機制。
　　實驗首先將雌雄SD大鼠按2：1定時成功配種后得到10只孕鼠，孕9.5 d將孕鼠隨機分為4組：正?？瞻捉M（Normal+Control group,NC組，2只）、正常西地那非組（Normal+Sildenafil group,NS組，2只）僅給予

2、橄欖油灌胃，模型空白組（Model+Control group,MC組，3只）、模型西地那非組（Model+Sildenafil group,MS組，3只）灌胃給予除草醚（125 mg/只，溶于2 ml橄欖油中）誘導(dǎo)產(chǎn)生C DH模型。孕11.5 d-20.5 d NS、MS兩組孕鼠每天灌胃給予西地那非（30mg/kg,溶于10ml/kg蒸餾水中）,其余各組每天給予等量蒸餾水，孕21 d（預(yù)產(chǎn)期前24 h）在戊巴比妥鈉麻醉下剖宮產(chǎn)取出所有

3、胎鼠并稱重，放大鏡下觀察膈疝形成情況并取出兩側(cè)肺組織并稱重，肺組織切片HE染色觀察各組肺微、小血管、細小支氣管、肺泡的發(fā)育情況，免疫組織化學(xué)染色定性、定位分析 HIF-2α、VEGF-A在各組中的表達情況，Western blotting法定量檢測HIF-2α、VEGF-A蛋白在胎肺中的表達情況，所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　動物實驗結(jié)果顯示各組孕鼠無死亡，MC組3只孕鼠共生產(chǎn)38只胎鼠，其中有膈疝形成的胎鼠23只，致畸率60.5

4、3％，MS組3只孕鼠共生產(chǎn)29只胎鼠，形成 CDH的胎鼠21只，致畸率72.41%，兩組致畸率無顯著差異（P﹥0.05）。MC組胎肺肺重與體重之比（Lw/Bw）較NC組降低（P<0.01），MC組與MS組間無顯著差異（P=0.76）。免疫組化結(jié)果顯示HIF-2α在NC、NS、MS組中表達較強，其陽性顆粒平均光密度分別為（0.2412±0.0057）、（0.2378±0.0051）和（0.2390±0.0054），在MC組表達較弱，平均光

5、密度為（0.2218±0.0106）。VEGF-A在NC、NS、MS組中表達較強，其陽性顆粒平均光密度為（0.1993±0.0064）、（0.1914±0.0059）和（0.1902±0.0076），在MC組中表達最弱，平均光密度為（0.1812±0.0080），HIF-2α與 VEGF-A陽性表達平均光密度之間呈正相關(guān)（r=0.463，P<0.01）。Western blotting結(jié)果顯示HIF-2α蛋白在NC、NS、MC、MS組中

6、表達相對灰度值分別為（1.407±0.159）、（1.026±0.230）、（0.577±0.274）和（1.195±0.035），與MC組相比， NC、MS組表達顯著升高(P<0.01）， NC、NS兩組表達無顯著差異（P=0.076）；VEGF-A蛋白在 NC、NS、MC、MS組中表達相對灰度值分別為（1.026±0.156）、（0.885±0.294）、（0.646±0.026）和（1.019±0.146），NC、MS組中相對表達