蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉末膠囊中活性成分分析及增強免疫力功能研究.pdf

1、以菌絲體為原料制成的保健品具有同天然蟲草相似的功效如免疫調(diào)節(jié)，抗腫瘤、抗氧化等，占據(jù)了很大的市場份額。蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊是從天然冬蟲夏草中分離出的無性型真菌“中國被毛孢”培育而成的菌絲體。但是從人工培育的菌絲體能否代替天然生長的蟲草用于食療和藥用，而以菌絲體作為保健食品并沒有一個統(tǒng)一的質(zhì)量規(guī)范。因此本課題主要以粗多糖、腺苷、蟲草素、甘露醇等主要活性成分來制定該產(chǎn)品的檢測方法，測定活性成分的含量并進行其增強免疫力功能研究。為蝙蝠蛾被

2、毛孢菌絲體粉末膠囊進行質(zhì)量控制以及對保健食品的研究提供依據(jù)具有重要意義。課題研究內(nèi)容主要包括兩大方面:
　　 一、蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊活性物質(zhì)含量測定研究
　　 1建立蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉末膠囊中粗多糖含量測定方法。
　　 方法:內(nèi)容物質(zhì)量體積比1∶100，沸水加熱1h，取續(xù)濾液85％乙醇沉淀，重復3次后，苯酚-硫酸法于480 nm處測定吸光度值。結果:平均加標回收率為91.9％，相對標準偏差為1.34％。<

3、br>　　 2建立建立了高效液相法-二極管陣列檢測器同時測定蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊中腺苷和蟲草素的測定方法。
　　 方法:室溫，以水為提取溶劑，質(zhì)量體積比(m/v)1∶40，超聲提取(超聲功率250W)45 min，離心，取上清液，定容，搖勻，過0.45μm濾膜;色譜柱Ultimate ColumnTM C18(4.6×250mm，5μm);流動相:乙腈-水(5∶95，v/v);流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃;檢測

4、波長:260nm;進樣量:10μL。結果:腺苷平均回收率100.49％，RSD=1.93％;蟲草素平均回收率97.51％，RSD=4.71％。
　　 3建立高效液相法-ELSD測定蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊中甘露醇含量的方法。
　　 方法:室溫，質(zhì)量體積比1∶25，超聲水提90 min。色譜條件:氨基柱(Hypersil NH24.6 mm×300 mm，5μm)，流動相:流動相:乙腈-水(85∶15);流速:1.0 mL

5、/min;柱溫:30℃;漂移管溫度為70℃，載氣(N2)流速為2.72 mL/min，進樣量20μL。結果:甘露醇平均回收率99.01％，RSD=3.52％，檢出限150μg/mL。
　　 4建立蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊中褪黑素含量的HPLC-MS測定方法。
　　 方法:以甲醇為提取溶劑，超聲波提取褪黑素的方法。色譜條件:色譜柱:ThermoBeta Basic-18(150 mm×4.6 mm，5μm);流動相:甲醇:

6、0.1％甲酸-水(60∶40);流速:0.6 mL/min;柱溫:40℃。用串聯(lián)離子阱質(zhì)譜在電噴霧電離正離子(ESI+)-二級質(zhì)譜(MS/MS)模式進行質(zhì)譜測定。結果:方法的線性范圍為10～200μg/kg，基質(zhì)加標工作曲線線性方程為y=-8575.85+10204.8x，相關系數(shù)r=0.9992。方法的定性檢出限為0.5μg/kg，定量檢出限為2.0μg/kg，平均加標回收率為77.01％～85.02％，相對標準偏差＜10％。

7、　　 二、蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊增強免疫力功能研究
　　 對蝙蝠蛾被毛孢菌絲體粉膠囊進行增強免疫力保健功能的試驗研究，研究內(nèi)容包括:碳廓清實驗測定;遲發(fā)型變態(tài)反應(DTH)檢測;抗體生成細胞和血清溶血素測定;小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗（半體內(nèi)法）和臟器/體重比值;ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗和小鼠NK細胞活性測定（乳酸脫氫酶LDH測定法）。根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（衛(wèi)生部2003）來判斷蝙蝠蛾被毛孢菌絲