毛栓孔菌菌絲體培養(yǎng)特性及其體外抗腫瘤活性的研究.pdf

1、T h e s t u d yo n t h em y c e l i u m c u l t u r eC h a r a C t e r i S t i c sa n d t h e a n t i ．t u m o re t i v i‘．t y o f p o l y s a c c h a r i d ei nv i t r o a c t i v i t yv i t r oo l T r a m e t e sh i r

2、s u t aT h e s i s s u b m i t t e d t oQ n g d a o A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t yI nF u l f i l l m e n t o f t h e R e q u i r e m e n tf o rt h eD e g r e e o fM a s t e ro f A g r o n o m yB i W a n g h

3、u a( D e p a r t m e n t o f L i f eS c i e n c e )S u p e r v i s o r ：P r o f ．S O N A i - R o n gQ i n g d a o ．C h i n aJ u n e ，2 0 1 2青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文 摘要毛栓孔菌菌絲體培養(yǎng)特性及其體外抗腫瘤活性的研究摘要對(duì)野生分離的多孔茵屬菌株采用改進(jìn)的C T A B 法進(jìn)行D N A 的提取分離，通過(guò)

4、P C R擴(kuò)增，電泳檢測(cè)并將所得結(jié)果通過(guò)I T S 測(cè)序；通過(guò)在G e n b a n k 中進(jìn)行比對(duì)和同源性分析，發(fā)現(xiàn)該茵株與毛栓孔菌( T r a m e t e sh i r s u t a ) 屬的同源性相似度極高，據(jù)此判斷該野生菌株為毛栓孔茵( T r a m e t e s h i r s u t a ) ．采用固體平板培養(yǎng)對(duì)毛栓孔菌茵絲體生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件和環(huán)境條件進(jìn)行研究，通過(guò)單因素篩選試驗(yàn)，確定茵絲體生長(zhǎng)的最佳碳源是蔗糖，

5、最佳氮源是酵母粉，最佳碳氮比是9 0 ：1 ，對(duì)茵絲體生長(zhǎng)最佳的無(wú)機(jī)鹽是K 2 H P 0 ．和N a ：S 0 ．；2 1 金維他對(duì)其茵絲體生長(zhǎng)促進(jìn)作用明顯，最適p H 為1 1 ，茵絲體生長(zhǎng)的最適溫度是3 4 ℃；黃光( 1 6 0 L x ) 對(duì)其茵絲體生長(zhǎng)的影響明顯。通過(guò)正交試驗(yàn)確定毛栓孔茵茵絲體生長(zhǎng)的最佳營(yíng)養(yǎng)條件是蔗糖4 ％，酵母粉1 ．3 ％，K 2 H P 0 ．0 ．0 5 { 6 ，N a 2 S O ．0 ．2 ％。

6、通過(guò)對(duì)毛栓孔菌菌株液體培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件和環(huán)境條件進(jìn)行研究，結(jié)果表明：毛栓孔菌液體培養(yǎng)的最佳碳源是乳糖，最佳氮源是硝酸鈉，最佳的碳氮比是5 0 ：1 ，V m 對(duì)其液體培養(yǎng)影響明顯，最佳無(wú)機(jī)鹽是K H ：P o ．和M g S 0 4 - 7 H ：0 。從經(jīng)濟(jì)適用角度考慮采用正交試驗(yàn)確定毛栓孔菌液體發(fā)酵多糖產(chǎn)量的最佳條件是：C s H - ：0 s 4 ％，( N H ．) z S O ．1 ％，K H ：P 0 ·0 ．1 ％

7、，M g S 0 ．·7 H ：0O ．0 3 ％。通過(guò)對(duì)裝液量、接種量、p H 的研究表明，在p H 4 、裝液量2 0 0 m L ，接種量5 m L 的條件下，毛栓孔菌液體發(fā)酵多糖產(chǎn)量最好。用水浸提法，通過(guò)對(duì)提取溫度、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)的研究確定用量分別是8 0 1 2 、2 ．5 h 、1 ：3 0 、2 次；對(duì)溫度、時(shí)間、料液比進(jìn)行正交試驗(yàn)，確定最佳條件是8 0℃、2 ．5 h 、1 ：4 0 。毛栓孔茵發(fā)酵