蛹蟲草活性組分的提取及其抗腫瘤效果的研究.pdf

1、蛹蟲草是寄生于昆蟲的真菌。近年來研究發(fā)現(xiàn)蛹蟲草含有蟲草素、多糖和甾醇等豐富的生理活性物質(zhì)，具有很高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。研究顯示其在腫瘤治療及輔助治療方面具有巨大的潛力。
　　 本研究共分為三個(gè)部分:蟲草素、腺苷、多糖的含量分析以及蟲草素的優(yōu)化提取、體內(nèi)體外抗腫瘤效果分析和抗腫瘤活性物質(zhì)的分離純化。研究從這三個(gè)部分切入，從藥物開發(fā)的角度，較為系統(tǒng)的分析了蛹蟲草水溶性活性組分和水提沉淀物在抗腫瘤方面的作用效果。
　　 研究

2、首先對(duì)蛹蟲草中的活性物質(zhì)——蟲草素、腺苷和多糖的含量進(jìn)行了測(cè)定，并比較了人工蛹蟲草與天然冬蟲夏草中蟲草素和腺苷的含量。研究以水作為溶劑，采用常溫超聲法提取，應(yīng)用高效液相色譜儀對(duì)蟲草素和腺苷的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛹蟲草中蟲草素和腺苷的含量分別為7.03mg/g和0.59mg/g，而天然冬蟲夏草在此種條件下未檢測(cè)出蟲草素和腺苷。研究采用苯酚.硫酸法測(cè)定人工蛹蟲草中多糖的含量，確定其含量為3.10％。
　　 為了提高蛹蟲草中最主要的

3、活性物質(zhì)之一——蟲草素的提取率，采用半仿生提取法對(duì)蛹蟲草中的蟲草素進(jìn)行了提取，并通過均勻設(shè)計(jì)法對(duì)提取溶劑pH值及提取時(shí)間兩個(gè)因素進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明:三次連續(xù)提取用水pH值分別為2.00，7.00，10.00，超聲波提取時(shí)間分別為45min，27min和27min，總時(shí)間為99min時(shí)，此條件下每g生藥材中可提取到7.417mg的蟲草素。此為蟲草素的提取及其中試生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。
　　 其次，為了探討蛹蟲草水提取物的抗腫瘤作用

4、，本研究從體外和體內(nèi)兩個(gè)角度對(duì)其抗腫瘤效果進(jìn)行了研究評(píng)估。體外實(shí)驗(yàn)以正常細(xì)胞人胚腎細(xì)胞HEK293，正常細(xì)胞人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HuVEC，人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，人結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo，人肝胚癌細(xì)胞HLF-K10，人肝胚癌細(xì)胞HLF-CPN(1)，人肝胚癌細(xì)胞HLF-Kollis，人肺腺癌細(xì)胞A549以及小鼠lewis肺癌細(xì)胞為研究對(duì)象，采用MTT法分析了蛹蟲草水提取物對(duì)正常細(xì)胞及癌細(xì)胞生長(zhǎng)的增殖抑制作

5、用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛹蟲草水提取物對(duì)所有細(xì)胞的生長(zhǎng)均具有一定的抑制作，且抑制作用呈時(shí)間——?jiǎng)┝恳蕾囆?yīng)。研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，蛹蟲草水提取物對(duì)人源細(xì)胞的細(xì)胞毒作用較弱，而對(duì)小鼠lewis肺癌細(xì)胞具有很強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制作用。
　　 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以小鼠艾氏腹水瘤(EAC)，小鼠肝癌腹水HepA為研究對(duì)象，考察了蛹蟲草粉，蛹蟲草水提取物，蛹蟲草水提沉淀物的體內(nèi)抗腫瘤作用，結(jié)果表明，以環(huán)磷酰胺為陽(yáng)性對(duì)照，蛹蟲草水提取物和蛹蟲草水提沉淀物對(duì)小鼠艾氏腹水癌(EA

6、C)均顯示出抑制活性，尤其是蛹蟲草水提沉淀物組對(duì)小鼠艾氏腹水癌(EAC)的抑制率接近30％，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 通過小鼠體內(nèi)急性毒實(shí)驗(yàn)，分析了不同方法提取得到的蛹蟲草水提取物及水提沉淀物的體內(nèi)毒性，結(jié)果表明蛹蟲草水提物及水提沉淀物均屬于實(shí)際無(wú)毒類，表明人工蛹蟲草及其水溶性和水提沉淀物分適合作為新的藥用資源，有進(jìn)一步開發(fā)和利用的價(jià)值。
　　 最后，以提取物質(zhì)對(duì)小鼠lewis肺癌細(xì)胞的毒性為指導(dǎo)，從蛹蟲草水溶性組分中分離