石花多糖的提取、分離、結(jié)構(gòu)分析及其抗腫瘤活性的研究.pdf

1、目的：從四川省冕寧縣山區(qū)所產(chǎn)石花中分離提取多糖，優(yōu)化提取條件；純化多糖和進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，并對(duì)得到的多糖成分WPT-B的抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。 方法：采用經(jīng)典的水提醇沉的方法提取石花多糖。建立了以苯酚-硫酸法測(cè)定石花多糖含量的方法。以總糖含量為考察指標(biāo)，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)的方法對(duì)提取過程中加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)和提取溫度四因素進(jìn)行了提取條件的優(yōu)選研究。通過考察脫除率和多糖保存率，從幾種不同的脫色和除蛋白方法中優(yōu)選了粗多糖的

2、純化工藝。將得到的石花粗多糖用DEAE-Dex-trangelA-25和SephadexG-200層析柱進(jìn)一步分離純化，得到兩個(gè)均一體多糖組分，分別命名為WPT-A和WPT-B。對(duì)這兩個(gè)組分進(jìn)行了分子量測(cè)定、紫外及紅外分析，水解并乙?；筮M(jìn)行氣相色譜分析確定單糖組成及質(zhì)量比例。最后對(duì)WPT-B的急性毒性和抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。 結(jié)果：正交試驗(yàn)結(jié)果表明，多糖提取的優(yōu)化條件為：溫度為100℃，加10倍量的水，提取時(shí)間3h，提取3次。

3、按此優(yōu)化條件提取，經(jīng)測(cè)定石花中多糖含量平均值為17.040％。優(yōu)選樹脂脫色法和三氯乙酸除蛋白法對(duì)石花粗多糖進(jìn)行純化，再經(jīng)過兩次柱層析從石花中分離得到兩個(gè)單一組分：WPT-A和WPT-B。氣相色譜分析結(jié)果顯示，WPT-A單糖組成為：葡萄糖、木糖、甘露糖及半乳糖，其摩爾比為3:2.5:6:1，WPT-B含有葡萄糖、木糖及甘露糖，其摩爾比為5:5:3。經(jīng)HPLC法分析WPT-A和WPT-B的重均分子量分別為51454和62830。對(duì)WPT-B

4、的急性毒性和抗腫瘤活性進(jìn)行了測(cè)定。在小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)中，以一次最大劑量法考察，小鼠無死亡現(xiàn)象；在WPT-B的抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)中，WPT-B對(duì)H22小鼠腫瘤平均抑瘤率達(dá)到58.04％，且以12mg/kg劑量組抑瘤效果最好，各組與模型組相比均存在顯著性差異。在WPT-B和順鉑聯(lián)合應(yīng)用抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)中，各聯(lián)合用藥組與順鉑組相比，抑瘤率均有所提高，其中WPT-B12mg/kg+順鉑4mg/kg組和WPT-B24mg/kg+順鉑4mg/kg組的抑瘤

5、效果提高顯著。聯(lián)合用藥還可以顯著降低順鉑對(duì)脾臟和胸腺的損傷，顯示出良好的減毒增效作用。 結(jié)論：按正交試驗(yàn)得出多糖提取的優(yōu)化工藝，并確定了樹脂脫色法與三氯乙酸法為石花粗多糖純化的較好方法，提高了多糖提取率和保存率，所得實(shí)驗(yàn)條件溫和，操作簡(jiǎn)便，易于今后產(chǎn)業(yè)化。經(jīng)提取、純化得到的兩個(gè)多糖WPT-A和WPT-B同為均一體雜多糖。急性毒性實(shí)驗(yàn)表明，石花多糖WPT-B無明顯毒性；抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)顯示，其對(duì)H22小鼠移植性腫瘤具有顯著的抑制作用