低溫誘導(dǎo)淡水白鯧尾鰭細(xì)胞CBT凋亡的研究.pdf

1、淡水白鯧屬于喜溫性魚類，水溫降至10℃時就出現(xiàn)寒害死亡。本實驗室在1997年建立了淡水白鯧尾鰭細(xì)胞系CBT，發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞系具有與整體相一致的溫度生長特性——10℃脅迫致死，這為探討喜溫性魚類細(xì)胞的寒害機理提供了一個較為理想的研究模型。 本實驗以CBT細(xì)胞為研究對象，探討了10℃低溫導(dǎo)致淡水白鯧尾鰭細(xì)胞系CBT死亡的原因及其可能機制。實驗采用CCK-8試劑盒法檢測了低溫處理前后的細(xì)胞存活率；用熒光染料H2DCFDA染色測定細(xì)胞內(nèi)活性

2、氧(ROS)含量的變化；通過亞二倍體峰和Tunel分析檢測細(xì)胞凋亡，并用瓊脂糖凝膠電泳法對死亡細(xì)胞的DNA進行了分析；用Hoechst33258染色觀察凋亡細(xì)胞核形態(tài)變化；比色法測定乳酸脫氫酶(LDH)釋放率。實驗結(jié)果表明，隨著CBT細(xì)胞受10℃低溫作用時間延長，細(xì)胞存活率顯著下降，細(xì)胞內(nèi)ROS含量和LDH釋放率顯著增加(P＜0.01)。低溫處理3d的CBT細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測出現(xiàn)亞二倍體峰，凋亡率為13％。再經(jīng)32℃復(fù)溫12h后，瓊脂

3、糖凝膠電泳顯示DNA凋亡梯帶；Tunel檢測，低溫處理3d、4d和5d的CBT細(xì)胞分別有23.49％，27.72％和35.10％發(fā)生凋亡。低溫處理5d的CBT細(xì)胞核分裂成多個小核，呈現(xiàn)出典型的凋亡小體的形狀。維生素E濃度梯度顯示，維生素E對低溫處理的CBT細(xì)胞有明顯的保護作用，能明顯改善細(xì)胞活力和LDH的釋放現(xiàn)象，且在50μM至1000μM濃度范圍內(nèi)，該保護作用呈劑量依賴性。由此認(rèn)為，10℃低溫能誘導(dǎo)CBT細(xì)胞凋亡。ROS參與了10℃低