三色堇熱激蛋白70(HSP70)基因的克隆及生物信息學(xué)分析.pdf

1、熱激蛋白（HSP）是生物體遭受脅迫時(shí)產(chǎn)生的一類可以對相關(guān)蛋白進(jìn)行調(diào)控從而增強(qiáng)生物體抗性的保護(hù)性蛋白，普遍分布在各種生物體內(nèi)。其中熱激蛋白70（HSP70）是目前在基因和蛋白層面研究的最為深入的一種熱激蛋白。三色堇（Violatricolor）花色豐富，花期頗長，是重要的花壇、盆栽觀賞花卉，應(yīng)用十分廣泛。然而，當(dāng)前絕大多數(shù)三色堇品種不耐高溫導(dǎo)致應(yīng)用受限。從較耐熱三色堇種質(zhì)中分離 HSP70基因并進(jìn)行相關(guān)生物信息學(xué)分析，對三色堇耐熱性研究及

2、培育出具有耐熱新品種有重要意義。
　　本試驗(yàn)以三色堇HAR為試材，對其進(jìn)行42℃20min,40min,60min的熱激處理，誘導(dǎo)HSP70基因表達(dá)。利用同源序列克隆法，在GenBank數(shù)據(jù)庫中搜尋與堇菜科親緣關(guān)系相近的植物HSP70基因序列，分析保守區(qū)域結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，應(yīng)用PCR技術(shù)從三色堇HAR中擴(kuò)增獲得882bp的HSP70基因片段，再利用RACE技術(shù)獲取三色堇HAR的HSP70基因的5’端和3’端序列，獲得基因全長為2

3、169bp，并對中間片段進(jìn)行質(zhì)粒連接，重組質(zhì)粒構(gòu)建，獲得HSP70-pMD18-T重組質(zhì)粒。
　　利用生物信息學(xué)軟件對三色堇 HSP70全基因進(jìn)行分析，最大開放閱讀框長度為1950bp（124-2083bp），編碼649個(gè)氨基酸。以開放為基礎(chǔ)進(jìn)行相關(guān)生物信息學(xué)分析。系統(tǒng)發(fā)育樹分析顯示，三色堇與歐洲油菜和鹽芥的相似率為47％，親緣關(guān)系較近。蛋白預(yù)測分析顯示 HSP70為膜外疏水蛋白，無信號肽位點(diǎn)，屬于NBD-sugar-kinase