裂殖酵母中人DJ-1同源蛋白亞細(xì)胞定位及SpDJ-1在脅迫反應(yīng)中作用的研究.pdf

1、人DJ-1(HsDJ-1)是一種與早期帕金森疾病和很多癌癥相關(guān)的蛋白。粟酒裂殖酵母中有1個(gè)與其同源性很高的SpDJ-1蛋白和5個(gè)同源性較遠(yuǎn)的Hsp31蛋白(Hsp3101，Hsp3102，Hsp3103，Hsp3104，Hsp3105)。已有報(bào)道，DJ-1及其同源蛋白在很多的物種中參與抗氧化刺激，但在裂殖酵母中DJ-1蛋白是否參與抗氧化刺激并未報(bào)道且這種保護(hù)機(jī)制并不清楚。
　　本論文主要研究粟酒裂殖酵母細(xì)胞中SpDJ-1和Hsp3

2、101-3105蛋白在不同強(qiáng)度啟動(dòng)子調(diào)控下的蛋白亞細(xì)胞定位、蛋白在不同生長(zhǎng)時(shí)期的表達(dá)水平以及SpDJ-1蛋白抗氧化刺激的作用，并對(duì)其這種作用機(jī)制做出初步的解釋。
　　我們首先通過GFP熒光標(biāo)記研究發(fā)現(xiàn)，在中等強(qiáng)度nmt1啟動(dòng)子調(diào)控下，SpDJ-1、Hsp3101、Hsp3105既存在于細(xì)胞核又存在于細(xì)胞質(zhì)中，Hsp3102僅存在于細(xì)胞質(zhì)中，Hsp3104僅存在于細(xì)胞質(zhì)中且呈胞質(zhì)小點(diǎn)狀，而在基因自身啟動(dòng)子調(diào)控下，SpDJ-1和Hsp

3、3101既定位于細(xì)胞核中也定位于細(xì)胞質(zhì)中，Hsp3102只存在于細(xì)胞質(zhì)中，結(jié)果表明這些同源蛋白定位于不同的亞細(xì)胞器中，預(yù)示著功能或者功能發(fā)揮位置的不一;繼而Western b lot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SpDJ-1、Hsp3101、Hsp3102、Hsp3105蛋白對(duì)數(shù)期至穩(wěn)態(tài)期有一個(gè)明顯的遞增趨勢(shì)，而且在穩(wěn)態(tài)期趨于平穩(wěn)，說明蛋白主要是在穩(wěn)態(tài)期表達(dá)并積累，預(yù)示著蛋白可能是在穩(wěn)態(tài)期發(fā)揮作用。最后我們通過檢測(cè)敲除SpDJ-1基因和高表達(dá)SpDJ-1基因