槲皮素誘導(dǎo)Hep G2細(xì)胞自噬的分子機(jī)制研究.pdf

1、蕎麥?zhǔn)且环N藥食同源的食物，含有眾多的生物活性物質(zhì)。其中苦蕎中的多種生物活性物質(zhì)均高于普通蕎麥，類黃酮的含量最為豐富，所含的黃酮中又以蘆丁、槲皮素為主。近年來，槲皮素由于可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖而成為具有潛力的抗腫瘤藥物，成為各國學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)。最近研究報道，槲皮素可以誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬，但是其詳細(xì)的機(jī)制還未見報道，未形成較一致的見解。本文將采用現(xiàn)代分子生物學(xué)及細(xì)胞學(xué)技術(shù)，著重研究Ca2+在槲皮素誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞自噬中的作用，為揭示槲皮素誘

2、導(dǎo)細(xì)胞自噬的分子機(jī)制增添新的內(nèi)容。
　　 本文采用熒光染色試劑單丹磺酰尸胺(MDC)及pCMV-GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，觀察槲皮素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生自噬;Proteasome-GloTMCell-BasedReagent檢測槲皮素對細(xì)胞內(nèi)蛋白酶體活性的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測槲皮素或鈣離子螯合劑作用HepG2細(xì)胞后細(xì)胞自噬水平的變化及胞內(nèi)Ca2+濃度的變化;MTT法和流式細(xì)胞儀分別檢測3-MA存在時細(xì)胞增殖率及凋亡

3、率的變化。
　　 檢測結(jié)果顯示，在設(shè)定的槲皮素濃度(0～50μg/mL)范圍內(nèi)，其對HepG2細(xì)胞生長有顯著的抑制作用，呈明顯的時間、劑量依賴性;槲皮素可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡;槲皮素對HepG2細(xì)胞內(nèi)蛋白酶體trypsin-like、chymotrypsin-like以及caspase-like酶活性均有顯著地抑制作用;同時，槲皮素誘導(dǎo)HepG2發(fā)生自噬過程中細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度有所升高;在抑制劑BAPTA-AM存在

4、時，與單獨(dú)槲皮素組相比，細(xì)胞自噬水平明顯降低，進(jìn)一步揭示細(xì)胞內(nèi)增加的鈣離子主要來自細(xì)胞內(nèi)鈣庫中鈣離子的釋放。當(dāng)槲皮素濃度為0～50μg/mL，作用時間為24h時，3-MA+槲皮素組比槲皮素組的細(xì)胞凋亡率有所提高，表明自噬的抑制促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡，進(jìn)一步揭示自噬對細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。
　　 綜上所述，槲皮素能明顯抑制HepG2細(xì)胞的生長，并誘導(dǎo)其發(fā)生保護(hù)性自噬。蛋白酶體活性實(shí)驗(yàn)分析表明，槲皮素誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的過程中可能涉及泛素-蛋