Klotho基因多態(tài)性及蛋白水平與慢性腎臟病動(dòng)脈硬化相關(guān)性研究.pdf

1、本文對Klotho基因多態(tài)性及蛋白水平與慢性腎臟病動(dòng)脈硬化相關(guān)性進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分
　　第一部分：Klotho基因多態(tài)性與慢性腎臟病動(dòng)脈硬化相關(guān)性研究。
　　目的：研究慢性腎臟病患者Klotho基因G-395A單核苷酸多態(tài)性的分布，探討該基因多態(tài)性位點(diǎn)及蛋白水平與慢性腎臟病及動(dòng)脈硬化的相關(guān)性。
　　方法：運(yùn)用FQ-PCR技術(shù)（Taqman探針法）對各研究對象[包括156例慢性腎臟病患者（其中非透析組包括CK

2、D2-3期56例、CKD4-5期60例，血透組40例）和健康對照組（60例）]進(jìn)行klotho基因G-359A多態(tài)性分型，檢測klotho蛋白水平，頸動(dòng)脈超聲檢查進(jìn)行動(dòng)脈硬化分組，比較各組間基因型頻率、等位基因頻率，分析了CKD患者慢性腎臟病及動(dòng)脈硬化發(fā)生的相關(guān)性因素。
　　結(jié)果：①在研究人群中G-395A多態(tài)性位點(diǎn)共檢測出GG、GA、AA3種基因型，各組符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，具有群體代表性。②慢性腎臟病組G-

3、359A基因頻率以及等位基因頻率和對照組之間存在差異（P均<0.05）。非透析組G-395A基因型分布及等位基因頻率與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05），血液透析組等位基因頻率與對照組等位基因頻率存在差異（P<0.01）。CKD4-5期 GA+AA基因頻率及A等位基因頻率低于對照組及CKD2-3期組（P均<0.05）。③CKD2-5期非透析患者動(dòng)脈硬化組 GA+AA基因型頻率及 A等位基因頻率均低于非動(dòng)脈硬化組（P均<0.01

4、），血液透析患者動(dòng)脈硬化組GA+AA基因型頻率及A等位基因頻率低于非動(dòng)脈硬化組（P均<0.05）。④CKD2-5期非透析患者動(dòng)脈硬化組與非動(dòng)脈硬化組患者年齡、糖尿病、磷、iPTH、、eGFR、klotho蛋白差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，基因型間臨床指標(biāo)及kltoho蛋白水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Logistic回歸分析表明在CKD2-5期非透析患者中年齡、糖尿病、eGFR、klotho蛋白、G-395A等位基因(GA+AA)與動(dòng)脈硬化具

5、有相關(guān)性，klotho蛋白與慢性腎臟病的發(fā)生具有相關(guān)性。⑤血液透析患者組動(dòng)脈硬化組與非動(dòng)脈硬化組在年齡、糖尿病、收縮壓、hsCRP、FGF23、klotho蛋白方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），基因型間臨床指標(biāo)及kltoho蛋白水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Logistic回歸分析表明年齡、hsCRP、FGF23、G-395A基因型(GA+AA)與動(dòng)脈硬化具有相關(guān)性。
　　結(jié)論：①在研究人群中存在Klotho基因G-395A多態(tài)性。②CK

6、D患者血清klotho蛋白水平升高，使慢性腎臟病發(fā)生危險(xiǎn)度減少，證實(shí)血清 klotho蛋白水平可能是CKD發(fā)生的保護(hù)性因素。③Klotho基因G-395A位點(diǎn)A等位基因可能是CKD非透析及血透患者動(dòng)脈硬化發(fā)生的遺傳保護(hù)因素。CKD非透析患者血清klotho蛋白水平的升高，動(dòng)脈硬化發(fā)生的危險(xiǎn)度減少，證實(shí)血清klotho蛋白水平可能是其動(dòng)脈硬化發(fā)生的保護(hù)性因素。④年齡、糖尿病、FGF23、eGFR降低是 CKD非透析患者動(dòng)脈硬化發(fā)生的危險(xiǎn)因

7、素。⑤年齡、hsCRP、FGF23是CKD血透患者動(dòng)脈硬化發(fā)生的危險(xiǎn)因素。
　　第二部分：血klotho蛋白及FGF23水平與慢性腎臟病礦物質(zhì)代謝及動(dòng)脈硬化的相關(guān)性研究。
　　目的：觀察慢性腎臟病不同階段klotho蛋白、FGF23水平的變化，探討其與礦物質(zhì)代謝及動(dòng)脈硬化的關(guān)系。
　　方法：選取慢性腎臟病患者163例，根據(jù)eGFR分組CKD2期23例，CKD3期32例、CKD4期30例，CKD5期78例，CKD5期分為

8、非透析組41例，血透組37例。CKD2-5期非透析患者經(jīng)頸部彩超檢測頸動(dòng)脈內(nèi)膜厚度分為動(dòng)脈硬化組54例，非動(dòng)脈硬化組72例。另設(shè)健康對照組33例。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測klotho蛋白及FGF23水平，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析klotho蛋白、FGF23與礦物質(zhì)代謝及動(dòng)脈硬化的關(guān)系。
　　結(jié)果：①慢性腎臟病非透析患者中，klotho蛋白水平均較對照組降低（P<0

9、.01），CKD2期及3期組klotho蛋白水平均高于CKD4、5期組（P<0.01）；CKD3-5期組患者FGF23、iPTH水平均較對照組升高（P<0.01），CKD2期-5期各組FGF23、iPTH水平存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）；相關(guān)性分析表明klotho蛋白與FGF23（r=-0.823，P＜0.01）、鈣磷乘積（r=-0.697，P＜0.01）、血磷（r=-0.785，P＜0.01）、iPTH（r=-0.692，P＜0.0

10、1）均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，與血鈣呈正相關(guān)關(guān)系（r=-0.739，P<0.01）。校正年齡、性別及 eGFR后，klotho仍與年齡、eGFR呈獨(dú)立相關(guān)關(guān)系。FGF23與iPTH（r=0.813，P＜0.01）、血磷（r=0.838，P＜0.01）、鈣磷乘積（r=0.794，P＜0.01）均呈正相關(guān)關(guān)系，與血鈣呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.675，P<0.01）。②CKD5期非透析組klotho蛋白高于血液透析患者，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），F(xiàn)G

11、F23高于血液透析組，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），iPTH高于血透組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）,血鈣、磷均低于血液透析組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）,鈣磷乘積低于血透組（P＜0.01）。③應(yīng)用LOESS觀察 CKD2-5期患者（非透析）血清klotho蛋白、FGF23、iPTH、血鈣、磷與eGFR的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)血清 klotho蛋白與 eGFR呈線性相關(guān)關(guān)系，eGFR每下降1ml/min/1.73m2，血清klotho下降5.35

12、pg/ml（95％CI5.02-5.68pg/ml，P＜0.01）。校正年齡后，eGFR每下降1ml/min/1.73m2，血清klotho蛋白降低5.31pg/ml（95%CI5.01-5.64pg/ml，P＜0.01）。血清 FGF23、iPTH、血磷均與eGFR呈非線性相關(guān)。在CKD2期血清FGF23水平無明顯變化，在CKD2-3期iPTH和血磷變化不顯著。當(dāng)eGFR下降至42ml/min/1.73m2時(shí)血FGF23出現(xiàn)顯著升高，

13、而血iPTH當(dāng)eGFR下降至28ml/min/1.73m2時(shí)、血磷當(dāng) eGFR下降至28ml/min/1.73m2時(shí)出現(xiàn)升高顯著。④CKD2-5期非透析患者動(dòng)脈硬化組年齡、BMI、HGB、FGF23、iPTH高于非動(dòng)脈硬化組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而血清klotho蛋白明顯低于非動(dòng)脈硬化組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示klotho蛋白（OR=0.988，95%CI0.978-0.998，P＜

14、0.05）和 FGF23（OR=1.086，95%CI1.019-1.056，P＜0.05）與CKD患者動(dòng)脈硬化發(fā)生具有相關(guān)性。
　　結(jié)論：①CKD2-5期非透析患者血清FGF23的升高早于血磷和血iPTH的升高，而血清klotho蛋白在血清FGF23升高之前出現(xiàn)下降，因此推斷klotho蛋白可能是CKD礦物質(zhì)代謝紊亂的早期生物學(xué)標(biāo)記物。②Klotho蛋白、FGF23可能是CKD2-5期非透析患者動(dòng)脈硬化的影響因素，klotho蛋