超高壓對Litopenaeus vannamei原肌球蛋白結(jié)構(gòu)及其免疫原性的影響.pdf

1、凡納濱對蝦中的原肌球蛋白(tropomyosin，TM)是引發(fā)食用者對該類蝦產(chǎn)生嚴重過敏的最重要因素之一，其引發(fā)的過敏反應不僅會降低過敏者的生活質(zhì)量、危及生命，也會大大限制人們對于該類蝦的消費。探討超高壓處理對于該蛋白免疫原性和結(jié)構(gòu)的影響，對分析解釋引發(fā)該蛋白免疫原性變化的內(nèi)在原因具有重要的理論意義和實際應用價值。
　　本研究從天然的凡納濱對蝦TM（純度＞95％）出發(fā)，利用超高壓處理（處理條件:壓力分別為100、200、300、4

2、00、500、600、700以及800MPa;時間分別為10、20、30以及40min;溫度分別為10、20、30和37℃）該蛋白，采用間接酶聯(lián)免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay，indirect ELISA)檢測TM的免疫原性;生物膜層干涉技術(shù)(Bio-layer Interferometry，BLI)檢測TM與其抗體的結(jié)合性能;圓二色譜法、紅外光譜法以及苯胺基萘磺酸(AN

3、S)熒光探針法檢測分析超高壓處理引發(fā)TM免疫原性變化可能的內(nèi)在原因，包括:蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)組成的變化、蛋白表面疏水性。
　　超高壓處理能夠改變TM的免疫原性，不同條件下超高壓處理對于TM免疫原性具有不同程度影響，在有些條件下處理后的TM的免疫原性會升高，其中10℃下400MPa超高壓處理TM10min后免疫原性升高程度最大，與對照組比較其免疫原性約升高了27.6％。而在有些條件下會降低TM免疫原性，其中10℃下400MPa超高壓處理

4、TM40min后免疫原性降低程度最大，與對照組比較其免疫原性約降低了52.0％。但超高壓處理后TM免疫原性在有些條件下會隨壓力的變化具有一定的趨勢，其中20℃、30℃和37℃超高壓處理條件下在一定壓力范圍內(nèi)隨著壓力的增大其免疫原性呈先降低后升高的趨勢。同時采用生物膜層干涉技術(shù)測定20℃條件下超高壓處理對抗原抗體結(jié)合能力的影響結(jié)果表明，經(jīng)超高壓處理后TM與其抗體結(jié)合能力的變化結(jié)果與間接ELISA測定其免疫原性變化結(jié)果一致，進一步驗證了結(jié)果

5、的準確性。
　　圓二色譜法(CD)和紅外光譜法(IR)分析結(jié)果表明超高壓處理引起二級結(jié)構(gòu)組成變化不大（CD分析結(jié)果:α-螺旋占804％～82.1％，β-折疊占0.0％～06％，β-轉(zhuǎn)角占40％～4.9％，無規(guī)則卷曲占14.6％～15.2％; IR分析結(jié)果:α-螺旋占23.0％～24.7％，β-折疊占22.2％～253％，β-轉(zhuǎn)角占41.2％～43.9％，無規(guī)則卷曲占9.1％～107％)，因此超高壓對TM二級結(jié)構(gòu)含量的影響不顯著。而

6、ANS熒光探針法分析結(jié)果表明超高壓處理能夠改變TM的表面疏水性，影響其三級結(jié)構(gòu)。不同超高壓處理對TM表面疏水性的作用程度不同，某些條件下處理后的TM表面疏水性變化沒有規(guī)律性，但在一定的壓力范圍內(nèi)，隨著壓力的增大TM表面疏水性呈先升高后降低的趨勢，其中超高壓處理20℃下，在100～700MPa壓力條件下處理40min時，隨著壓力的增大蛋白質(zhì)表面疏水性呈降低趨勢，在300MPa壓力作用下最低，當壓力繼續(xù)增大至一定程度時(壓力≤700MPa)