刺五加酸激活LXR信號(hào)通路改善肝纖維化的研究.pdf

1、目的：刺五加酸是由刺五加的根皮部提取的一種海松二烯二萜類物質(zhì)，前期研究發(fā)現(xiàn)其具有較好的肝保護(hù)作用，本研究采用四氯化碳誘導(dǎo)小鼠肝纖維化模型和活化肝星狀細(xì)胞，探討刺五加酸對(duì)肝纖維化的改善作用以及具體的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：通過(guò)腹腔注射10％四氯化碳橄欖油溶液2 ml/kg，前4周每周2次，后4周每周1次，連續(xù)8周，制作小鼠肝纖維化模型。分別灌胃給予小鼠不同劑量（20 mg/kg或50 mg/kg）的刺五加酸，每周3次，連續(xù)8周。采集血

2、清和肝臟存于-80℃。用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）及腫瘤壞死因子（TNF-α）活性的變化。應(yīng)用H＆E、Masson、免疫組化3種方法染色，觀察肝組織病理學(xué)改變。檢測(cè)α-SMA、Collagen-I、MMP-13、TIMP-1、LXRs和NF-кB/IкB-α的蛋白表達(dá)水平。
　　取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期大鼠肝星狀細(xì)胞，用TGF-β（5ng/ml）刺激2 h后，分別給予不同濃度（1、3、10

3、μmol/l）的刺五加酸孵育24 h，收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白和細(xì)胞核蛋白進(jìn)行蛋白免疫印跡分析，測(cè)定α-SMA與LXRs的蛋白表達(dá)水平。
　　GW3965是人工合成的LXR激動(dòng)劑，研究表明LXR激動(dòng)劑能夠抑制小鼠巨噬細(xì)胞內(nèi)多種炎癥性調(diào)節(jié)器的表達(dá)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人的肝星狀細(xì)胞，分別給予不同濃度（0.125、0.25、0.5、1、2μM）的LXRs激動(dòng)劑GW3965孵育18 h，測(cè)定LXRs蛋白隨劑量變化的表達(dá)水平；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人的肝星

4、狀細(xì)胞，給予不同濃度（1、3、10、20μmol/l）的刺五加酸和2μM的GW3965孵育18 h，然后用LPS（1μg/ml）刺激30 min，測(cè)定LXRs、α-SMA、Collagen-I、TIMP-1、NF-кB/IкB-α的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，與四氯化碳模型組相比，刺五加酸抑制了四氯化碳導(dǎo)致的肝纖維化小鼠血清中ALT、AST、TNF-α活力的升高；刺五加酸抑制了四氯化碳誘導(dǎo)的α-SMA、Collagen

5、-I的表達(dá)，同時(shí)調(diào)整了 MMP-13/TIMP-1的比率；刺五加酸顯著上調(diào)了LXRα和LXRβ的表達(dá)，同時(shí)抑制了NF-κB的核轉(zhuǎn)錄。
　　在體外實(shí)驗(yàn)中，刺五加酸在一定濃度范圍內(nèi)（0.78-5 ng/ml）對(duì)肝星狀細(xì)胞只有較低的細(xì)胞毒性；刺五加酸能夠明顯抑制TGF-β刺激的α-SMA的表達(dá)，具有劑量依賴性，同時(shí)刺五加酸劑量為3-10μM時(shí)顯著增加了LXRβ的表達(dá)。
　　GW3965為人工合成的LXRs激動(dòng)劑，與正常組相比，0.

6、125-2μM的GW3965能顯著增強(qiáng)LXR活化，并呈劑量依賴性，其中濃度為2μM時(shí)活化效果更為顯著；與正常組相比，給予活化的人的肝星狀細(xì)胞不同濃度（1、3、10、20μM）的刺五加酸和2μM GW3965時(shí)，劑量為3、10、20μM的刺五加酸和2μM GW3965能夠明顯降低α-SMA的蛋白水平，20μM刺五加酸和2μM GW3965能夠顯著降低Collagen-I的蛋白水平，而劑量為3、10、20μM的刺五加酸和2μM GW3965

7、能夠明顯降低TIMP-1的蛋白水平；劑量為10、20μM的刺五加酸和2μM GW3965能夠促進(jìn)NF-кB p65從細(xì)胞漿轉(zhuǎn)錄到細(xì)胞核，細(xì)胞核中NF-кB p65的表達(dá)明顯增多，而細(xì)胞漿中NF-кB p65的表達(dá)明顯減少。劑量為1、3、10、20μM的刺五加酸和2μM GW3965促進(jìn)IкB-α發(fā)生磷酸化，且呈劑量依賴性。
　　結(jié)論：刺五加酸可能通過(guò)激活LXRα和LXRβ抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)錄進(jìn)而改善四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化，并且通