刺五加酸調(diào)控FXR信號通路改善非酒精性脂肪肝的研究.pdf

1、目的:刺五加酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)為海松二烯二萜類，從刺五加的根皮部提取得來，目前的研究表明刺五加酸對于肝保護(hù)具有較好的作用效果，本研究采用Lieber-DeCarli液體高脂飼料飲食誘導(dǎo)小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)，同時(shí)采用細(xì)胞誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞，探討刺五加酸(AA)對NAFLD的改善作用以及具體的調(diào)控機(jī)制。
　　方法:通過每天給予Lieber-DeCarli(L-D)液體高脂飼料喂養(yǎng)，持續(xù)喂養(yǎng)12周，用來誘導(dǎo)小鼠非酒精性脂肪肝模型造

2、模成功。與此同時(shí)，配制不同劑量的刺五加酸（20mg/kg或40mg/kg）用于小鼠灌胃，每周連續(xù)灌胃7次，周期為12周。取小鼠血清和肝臟存放于-80℃。測定血清及肝臟中的生化指標(biāo)，如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)及甘油三酯(TG)水平的變化情況。我們采用H&E、油紅染色、Nile red、免疫組化等染色，觀察肝臟組織病理學(xué)變化。采用蛋白印跡法以及RT-PCR來檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、Ⅰ型膠原蛋白

3、(Collagen-Ⅰ)、法尼酯X受體(FXR)等的表達(dá)水平。取對數(shù)期的3T3-L1前脂肪細(xì)胞，給予誘導(dǎo)分化液刺激2天后，再給予含有胰島素和有不同濃度(0、1、3、5μmol/l)刺五加酸的培養(yǎng)基繼續(xù)孵育8～12天，每兩天換液一次，收集分化后的細(xì)胞，對細(xì)胞總蛋白和核蛋白進(jìn)行蛋白免疫印跡以及RT-PCR分析，測定FXR1以及SREBP1等的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，與Lieber-DeCarli高脂飼料組相比，刺五加酸抑制

4、了L-D液體高脂飼料導(dǎo)致的小鼠非酒精性脂肪肝血清中ALT、AST、TG活力的升高;刺五加酸可以抑制高脂飼料誘導(dǎo)的α-SMA、Collagen-Ⅰ的表達(dá)，激活肝X受體(LXRs)以及FXR1的表達(dá)，抑制固醇調(diào)節(jié)元件蛋白(SREBP1)的生成，進(jìn)而抑制脂肪酸的合成和蓄積。在體外實(shí)驗(yàn)中，刺五加酸能夠明顯抑制細(xì)胞分化誘導(dǎo)的SREBP1表達(dá)的升高，具有劑量依賴性，同時(shí)激活了LXRs以及FXR1的表達(dá)，從而抑制了脂質(zhì)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積。
　　結(jié)論