pH脅迫對三種養(yǎng)殖對蝦生理生化指標的影響.pdf

1、養(yǎng)殖水體是對蝦的生活環(huán)境，水質(zhì)的好壞直接影響對蝦的生長和經(jīng)濟效益。在氨氮、pH、溶解氧、溫度、鹽度等各項常規(guī)監(jiān)測理化指標中，pH是最重要的指標之一，是水體化學(xué)性狀和生命活動的綜合反應(yīng)，能嚴重影響水體的生物生產(chǎn)力。目前，國內(nèi)外雖有關(guān)于pH脅迫對對蝦生長、離子轉(zhuǎn)運酶及免疫相關(guān)因子方面的研究，但有關(guān)中國對蝦(Fenneropenaeuschinensis)、凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)、日本對蝦(Marsupenaeu

2、sjaponicus)三種養(yǎng)殖對蝦在同一條件下的比較研究還未見報道。本文以生長、存活、離子轉(zhuǎn)運酶及免疫因子為指標，研究三種對蝦對水體pH變化的耐受程度。研究共分三部分：
　　 第一部分：比較研究了中國對蝦、凡納濱對蝦和日本對蝦在對照組(pH8.2)、低pH脅迫組(pH7.2)和高pH脅迫組(pH9.2)養(yǎng)殖水體條件下的存活率、鰓離子轉(zhuǎn)運酶(Na+-K+-ATPase)活力及血淋巴誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)、酚氧化酶(PO)

3、、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、溶菌酶(LSZ)活性及肌肉RNA/DNA比值的變化情況。結(jié)果表明：對照組三種對蝦的存活率整個實驗期間均為100％；低pH和高pH脅迫條件下，96h時日本對蝦存活率分別為96.7％和97.0％；凡納濱對蝦存活率分別為60.1％和54.6％，中國對蝦的存活率分別為58.6％和13.3％。對照組條件下，凡納濱對蝦鰓離子轉(zhuǎn)運酶(Na+-K+-ATPase)活力最大，中國對蝦其次，日

4、本對蝦最??；在低和高pH脅迫條件下，中國對蝦鰓Na+-K+-ATPase活力變化幅度均比凡納濱對蝦大，日本對蝦的變化幅度最小，并且三種對蝦鰓Na+-K+-ATPase活力在高pH脅迫條件下變化幅度均較大。對照組條件下日本對蝦和凡納濱對蝦血清中非特異性免疫酶活性均顯著或極顯著高于中國對蝦，且日本對蝦的PO、SOD活力分別顯著、極顯著高于凡納濱對蝦；在低和高pH脅迫條件下，中國對蝦和凡納濱對蝦血清非特異性免疫酶的活力變化幅度均顯著高于日本對

5、蝦，并且中國對蝦PO、SOD、iNOS活力在高pH條件下變化幅度較大。與對照組相比，三種對蝦肌肉RNA/DNA比值隨著pH脅迫時間延長而降低，說明對蝦生長受到抑制。
　　 第二部分：采用熒光定量PCR技術(shù)，比較了中國對蝦、凡納濱對蝦和日本對蝦的離子轉(zhuǎn)運酶(Na+-K+-ATPase酶)、酚氧化酶原(proPO)、錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因在不同pH脅迫條件下的表達變化。主要結(jié)果如下：(1)不同pH脅迫條件下，三種對蝦鰓

6、Na+-K+-ATPase酶基因表達均隨著脅迫時間延長表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢，與對照組相比差異顯著(P<0.05)，各個pH脅迫組相比，高pH脅迫組(pH8.7、9.2組)對中國對蝦Na+-K+-ATPase酶基因表達的影響較大：三種對蝦相比，中國對蝦Na+-K+-ATPase酶基因表達的變化幅度較大，凡納濱對蝦次之，日本對蝦變化幅度較小。(2)不同pH脅迫條件下，中國對蝦和凡納濱對蝦proPO基因表達隨著脅迫時間延長表現(xiàn)出先上升后下

7、降的趨勢，而且出現(xiàn)兩個或者三個表達高峰，與對照組相比差異顯著(P<0.05)，日本對蝦proPO基因表達除pH9.2組外其余脅迫組均隨脅迫時間延長先有所下降，然后又升高，達到峰值后又下降的趨勢，各個pH脅迫組相比，高pH脅迫組對中國對蝦、凡納濱對蝦proPO基因表達的影響較大，pH6.7、7.2組對日本對蝦proPO基因表達的影響較大；三種對蝦相比，中國對蝦proPO基因表達變化幅度較大，凡納濱對蝦其次，日本對蝦表達變化較小。(3)不同

8、pH脅迫條件下，中國對蝦和日本對蝦Mn-SOD基因表達隨著pH脅迫延長表現(xiàn)出先升高后下降的趨勢，而且出現(xiàn)兩個或三個表達高峰，與對照組相比差異顯著(P<0.05)，凡納濱對蝦在pH7.2、7.7脅迫組Mn-SOD基因表達表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢，而高pH脅迫組則表現(xiàn)出表達量逐漸下降的趨勢，各個pH脅迫組相比，pH7.2組對中國對蝦影響較大，pH8.7、9.2組對凡納濱對蝦影響較大，pH7.7、8.7組對日本對蝦影響較大；三種對蝦之間相比，

9、日本對蝦Mn-SOD基因表達的變化幅度較大，中國對蝦次之，凡納濱對蝦最小。
　　 第三部分：本章以中國對蝦、凡納濱對蝦和日本對蝦為實驗材料，在解剖學(xué)的基礎(chǔ)上，分析不同pH脅迫條件下三種對蝦鰓、肝胰腺的外觀癥狀及顯微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果表明pH脅迫72h后蝦鰓顏色發(fā)烏，有的發(fā)黑，鰓組織充血、腫脹，出現(xiàn)大量炎癥細胞；上皮層增厚，相互間的間隙減小，有的區(qū)域出現(xiàn)粘連，鰓絲水腫，核固縮，并且中國對蝦、日本對蝦鰓組織在pH8.7、9.2條件下比

10、pH6.7、7.2條件下?lián)p傷嚴重，凡納濱對蝦pH6.7組損傷較9.2組損傷嚴重；pH脅迫72h后肝胰腺由鮮紅變?yōu)榘导t，肝胰腺組織廣泛受損，肝小管排列紊亂，邊界變得模糊，管腔也在縮??；肝小管之間的結(jié)締組織和上皮細胞出現(xiàn)損傷，細胞大量解體、細胞核固縮或消失，并且中國對蝦、日本對蝦肝胰腺組織在pH8.7、9.2條件下比pH6.7、7.2條件下?lián)p傷嚴重，凡納濱對蝦pH6.7、7.2組比8.7、9.2組損傷嚴重。
　　 由以上結(jié)果分析可知

11、，三種對蝦存活率相比，pH脅迫96h后中國對蝦存活率最低，凡納濱對蝦其次，日本對蝦存活率最高，并且中國對蝦pH9.2組存活率較pH7.2組低；不同pH脅迫組相比，中國對蝦pH9.2條件下鰓Na+-K+-ATPase，血淋巴PO酶活力及Na+-K+-ATPase，proPO基因表達和鰓組織損傷變化均較其他脅迫組大，這與pH9.2條件下存活率較低相一致，因此推測Na+-K+-ATPase和PO與pH脅迫較相關(guān)；三種對蝦相比，中國對蝦對pH脅