乙型肝炎病毒對(duì)pDC與NK細(xì)胞之間相互作用的影響.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的持續(xù)感染與機(jī)體抗病毒免疫應(yīng)答不足密切相關(guān)。自然殺傷細(xì)胞（Natural killer cell，NK cell）和漿樣樹(shù)突狀細(xì)胞(Plasmacytoid dendritic cell，pDC)是機(jī)體重要的天然免疫細(xì)胞。NK細(xì)胞能夠直接殺傷病毒感染的細(xì)胞，并且分泌抗病毒因子干擾素γ(Interferonγ,IFNγ)；pDC是體內(nèi)最主要的I型干擾素(Interferon，IFN

2、)分泌細(xì)胞。NK細(xì)胞和pDC之間的相互作用，在機(jī)體抗病毒免疫應(yīng)答中起著非常重要的作用。HBV動(dòng)物模型和慢性乙型肝炎患者中觀察到的宿主天然免疫缺陷，可能是導(dǎo)致HBV持續(xù)感染的主要原因。目前，慢性HBV感染中天然免疫缺陷的具體機(jī)制尚不完全清楚。
　　 本研究通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，分析乙型肝炎病毒對(duì)外周血pDC與NK細(xì)胞之間相互作用的影響。分離來(lái)自同一個(gè)健康成年人的外周血pDC和NK細(xì)胞，以pDC:NK=1:5的比例將兩者共同培養(yǎng)48小時(shí)

3、，在共培養(yǎng)體系中加入HepG2.2.15細(xì)胞來(lái)源的HBV，同時(shí)設(shè)有不含HBV的陰性對(duì)照組。在pDC-NK細(xì)胞共培養(yǎng)體系中加入CpG-A作為pDC的刺激物；加入單純皰疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)作為DNA病毒的對(duì)照物。采用流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定細(xì)胞表面分子的表達(dá)水平，特異酶聯(lián)免疫吸附方法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)以及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色法(Intracellul

4、ar staining，ICS)測(cè)定細(xì)胞因子的含量。測(cè)定NK細(xì)胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶的含量，以及NK細(xì)胞對(duì)K562靶細(xì)胞的殺傷能力，從而判定NK細(xì)胞的殺傷毒性。
　　 pDC與NK細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)后，在HBV不存在的情況下，二者均明顯活化，表現(xiàn)為細(xì)胞活性分子表達(dá)增加和細(xì)胞功能的提高。當(dāng)培養(yǎng)體系中存在HBV時(shí)：
　　 (1) HBV不影響NK細(xì)胞誘導(dǎo)的pDC的活性和IFNa的分泌。培養(yǎng)液中存在HBV時(shí)，CpG刺激的情況下，pD

5、C單獨(dú)培養(yǎng)以及NK-pDC共培養(yǎng)體系中CD83和CD86的表達(dá)水平均下降，而NK細(xì)胞誘導(dǎo)的pDC分泌的IFNα水平?jīng)]有顯著變化。
　　 (2) HBV不影響pDC誘導(dǎo)的NK細(xì)胞的活性和細(xì)胞殺傷毒性。pDC誘導(dǎo)的NK細(xì)胞表面活化分子(如CD69、CD25及HLA-DR)的表達(dá)不受HBV的影響。此外，HBV的出現(xiàn)也不影響pDC對(duì)NK細(xì)胞殺傷毒性的顯著增強(qiáng)作用。
　　 (3) HBV抑制pDC誘導(dǎo)的NK細(xì)胞分泌的IFNr。pD

6、C-NK共培養(yǎng)體系中加入其它病毒（如HSV）時(shí)，pDC誘導(dǎo)的NK細(xì)胞分泌的IFNr顯著增加。而加入HBV后，pDC誘導(dǎo)的NK細(xì)胞分泌的IFNγ水平顯著降低，不論pDC活性刺激物CpG是否存在。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，HBV對(duì)活化的NK細(xì)胞分泌IFNr沒(méi)有直接的抑制作用。由此可見(jiàn)，pDC-NK細(xì)胞共培養(yǎng)體系中IFNr水平的降低是由于HBV抑制pDC與NK細(xì)胞之間相互作用所致。
　　 與其他病毒（如HSV）相比，HBV非但不促進(jìn)并且抑制p

7、DC與NK細(xì)胞之間的相互作用。本實(shí)驗(yàn)觀察到HBV能夠顯著抑制pDC誘導(dǎo)的NK細(xì)胞分泌的IFNr，但并不影響NK細(xì)胞的殺傷活性。這與臨床上慢性乙型肝炎患者的NK細(xì)胞IFNγ分泌能力下降而殺傷活性不變相一致。
　　 綜上所述，HBV激活機(jī)體天然免疫系統(tǒng)的能力差，并且抑制pDC與NK細(xì)胞之間的相互作用，增加了持續(xù)感染的可能性。慢性乙型肝炎患者中NK細(xì)胞出現(xiàn)的功能損傷是否由于HBV抑制pDC與NK細(xì)胞之間相互作用所導(dǎo)致，有待進(jìn)一步闡明。