FBXW7通過調(diào)控FetuinA蛋白水平改善胰島素抵抗的機(jī)制研究.pdf

1、目的:FBXW7屬于SCF類泛素連接酶E3，可調(diào)控脂質(zhì)代謝關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子和胰島功能相關(guān)蛋白的泛素化降解。FetuinA是一類參與機(jī)體糖脂代謝調(diào)控的重要肝臟因子，與胰島素抵抗發(fā)生密切相關(guān)，但在肥胖狀態(tài)下肝臟中蛋白水平異常升高機(jī)制不得而知。本研究擬探究FBXW7在肥胖狀態(tài)下對(duì)FetuinA蛋白水平調(diào)節(jié)機(jī)制，有助于進(jìn)一步完善肥胖致胰島素抵抗機(jī)制。
　　方法:本課題結(jié)合高脂飲食誘導(dǎo)的HFD肥胖小鼠模型和正常飲食誘導(dǎo)的ob/ob小鼠肥胖模型，

2、檢測(cè)小鼠糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)，采用Real-time PCR和ELISA、western blot方法檢測(cè)小鼠肝臟FBXW7、FetuinA的mRNA水平和蛋白水平;在ob/ob小鼠和HFD小鼠肝臟中，過表達(dá)FBXW7，然后檢測(cè)小鼠糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)變化，檢測(cè)FBXW7、FetuinA的mRNA和蛋白水平變化。在HEK293T細(xì)胞和HepG2細(xì)胞中過表達(dá)FetuinA，給以CHX刺激，檢測(cè)FetuinA的蛋白水平變化;在HEK293T細(xì)胞中外

3、轉(zhuǎn)入FBXW7、FetuinA和泛素分子，通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FBXW7、FetuinA和泛素分子間是否發(fā)生相互作用。
　　結(jié)果:FBXW7在肥胖相關(guān)小鼠模型中蛋白水平下降;FBXW7在肥胖小鼠模型中過表達(dá)有助于機(jī)體糖脂代謝改善;FetuinA在肥胖小鼠肝臟中蛋白水平顯著升高但mRNA水平不具有穩(wěn)定趨勢(shì)變化;通過進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BXW7作用于FetuinA的泛素化蛋白酶體途徑降解且FFA能夠阻礙FetuinA的降解效率。