硒蛋白W對雞肝臟細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf

1、硒蛋白W(SelW)是硒蛋白家族一員，在多種動物的不同組織中均有表達(dá)，其中肝臟中的表達(dá)較多。氧化應(yīng)激能夠引起肝臟的損傷，如肝硬化、脂肪肝、酒精肝等。目前雞SelW被證明具有抗氧化的作用，然而SelW在中的作用機制仍不清楚。因此本實驗在復(fù)制缺硒雞模型與建立體外培養(yǎng)雞原代肝細(xì)胞SelW敲低與過表達(dá)模型的基礎(chǔ)上，采用實時熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)，分別檢測SelW、調(diào)亡因子（P53、caspase-3、Bax、Bak-1、Bcl-2）mR

2、NA以及炎癥因子（cox-2、PTGEs、TNF-α、iNOS、NF-κB）mRNA和細(xì)胞因子(IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IFN-γ)mRNA; Western blot法檢測了cox-2、PTGEs、NF-κB、SelW基因蛋白的表達(dá)變化量;TUNEL法檢測了細(xì)胞凋亡的程度，結(jié)果表明:
　　 1.本實驗成功建立雞原代肝細(xì)胞SelW敲低和過表達(dá)模型。成功將pcDNA3.1/SelW轉(zhuǎn)染到肝臟

3、原代細(xì)胞中的最適條件是六孔板每孔加入8μL轉(zhuǎn)染試劑和2μg的表達(dá)載體;將StealthRNA(S-RNA)轉(zhuǎn)染到雞肝臟原代細(xì)胞中的最適條件是六孔板每孔加入0.9μL S-RNA+1.5μLRNAiMAX。過表達(dá)細(xì)胞中SelW的含量比正常組中高2000多倍，敲低組中SelW的表達(dá)量為正常組的50％左右。
　　 2.雞缺硒組中，肝臟P53、caspase-3、Bax、Bak-1 mRNA的表達(dá)量增加，而Bcl-2 mRNA的表達(dá)隨著

4、時間的推移呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢;在體外，細(xì)胞過表達(dá)SelW時，P53、caspase-3、Bax、Bak-1 mRNA的表達(dá)量比對照組低，而Bcl-2的表達(dá)量高，而細(xì)胞敲低SelW組中，P53、caspase-3、Bax、Bak-1 mRNA的表達(dá)量增加，Bcl-2 mRNA的表達(dá)量降低，并且細(xì)胞的凋亡率明顯低于沉默組。表明SelW能夠抑制促凋亡因子的產(chǎn)生，促進(jìn)抗凋亡因子的表達(dá)，從而保護(hù)肝臟免受氧化應(yīng)激導(dǎo)致的凋亡損傷。
　　

5、3.雞缺硒組中，肝臟cox-2、PTGEs、TNF-α、iNOS及NF-κB mRNA的表達(dá)量比對照組中高，并且cox-2、PTGEs及NF-κB蛋白的表達(dá)量也一致;在體外，細(xì)胞過表達(dá)SelW時，cox-2、PTGEs、TNF-α、iNOS及NF-κB mRNA的表達(dá)量比對照組低，并且cox-2、PTGEs、NF-κB蛋白的表達(dá)量也降低，而細(xì)胞敲低SelW組中，cox-2、PTGEs、TNF-α、 iNOS及NF-κBmRNA的表達(dá)量升

6、高，其蛋白檢測結(jié)果一致。證明SelW能夠抑制炎癥因子的表達(dá)。
　　 4.雞缺硒組中，肝臟細(xì)胞因子IL-1、IL-6、IL-8及IL-17 mRNA的表達(dá)量比對照組高，而IL-4和IL-10 mRNA的表達(dá)量隨著時間的增加呈現(xiàn)降低的趨勢，IFN-γ mRNA的表達(dá)量是降低的;在體外，細(xì)胞過表達(dá)SelW時，在雞肝臟細(xì)胞中IL-1、IL-6、IL-8及IL-17的表達(dá)量比對照組低，而IL-4和IL-10 mRNA的表達(dá)量隨著時間的增加