煙酰胺的抗真菌增效作用及其分子機(jī)制研究.pdf

1、侵襲性真菌感染由于其高發(fā)病率和高死亡率，至今仍然是臨床上的重要負(fù)擔(dān)，其中白色念珠菌是導(dǎo)致念珠菌血癥等侵襲性真菌感染疾病的主要病原體。然而現(xiàn)有的抗真菌藥物種類少、副作用多，而且其研發(fā)速度也趕不上真菌耐藥的速度，尋找新穎的抗真菌藥物或現(xiàn)有抗真菌藥物的增效劑越來越重要。
　　煙酰胺（維生素B3）作為臨床上治療糙皮病的藥物，在近年來被臨床研究證實(shí)為能治療皮膚癌、共濟(jì)失調(diào)的有效藥物。此外，體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明煙酰胺能夠在體外抑制多種真菌的生長，

2、故本研究探索煙酰胺是否能作為抗真菌藥物的增效劑，以期減輕臨床上治療侵襲性真菌感染的負(fù)擔(dān)。
　　藥物敏感性實(shí)驗(yàn)顯示，煙酰胺能有效增強(qiáng)紫草素、氟康唑、兩性霉素B及卡泊芬凈對白念珠菌的作用，還能減輕唑類藥物的拖尾現(xiàn)象。棋盤式微量液基稀釋法證明，煙酰胺能協(xié)同上述藥物抗臨床耐藥的白色念珠菌、耐卡泊芬凈的白色念珠菌、熱帶念珠菌及新生隱球菌的作用。
　　通過構(gòu)建小鼠系統(tǒng)性念珠菌感染的模型，聯(lián)合使用煙酰胺和抗真菌藥物進(jìn)行考察。結(jié)果顯示煙酰胺

3、能有效增強(qiáng)氟康唑、卡泊芬凈治療小鼠系統(tǒng)性念珠菌感染的作用，使得小鼠生存率顯著提高。小鼠腎臟病理切片結(jié)果證實(shí)煙酰胺與氟康唑、卡泊芬凈聯(lián)用還能減輕白念珠菌造成的腎臟炎癥反應(yīng)、菌絲侵襲等情況。煙酰胺與卡泊芬凈聯(lián)用的體內(nèi)治療效果呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。此外，煙酰胺還能一定程度上增強(qiáng)兩性霉素B治療系統(tǒng)性念珠菌感染的作用。
　　免疫印跡法證實(shí)，紫草素通過抑制去乙?；嚓P(guān)基因HST3的作用從而誘導(dǎo)白念珠菌組蛋白H3上56位賴氨酸過度乙?；?，進(jìn)而協(xié)

4、同煙酰胺抗真菌，而氟康唑、兩性霉素B及卡泊芬凈均不能誘導(dǎo)H3上56位、9位及18位賴氨酸的過度乙?；＿\(yùn)用流式細(xì)胞儀我們發(fā)現(xiàn)，煙酰胺能誘導(dǎo)白念珠菌一定程度的凋亡，并且能顯著改變細(xì)胞周期，使得G1期或S期發(fā)生阻滯，這些作用有助于其協(xié)同抗真菌藥物抗真菌。運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡、透射電子顯微鏡、絮凝試驗(yàn)及細(xì)胞表面疏水性實(shí)驗(yàn)等方法，我們發(fā)現(xiàn)煙酰胺通過抑制HST3的功能，從而導(dǎo)致白色念珠菌細(xì)胞壁上甘露糖含量減少、幾丁質(zhì)含量增加、β-(1，3)-gl

5、ucan暴露以及細(xì)胞壁松弛、細(xì)胞膜皺縮及邊緣模糊、胞漿內(nèi)細(xì)胞器邊緣模糊、真菌絮凝能力增強(qiáng)、細(xì)胞表面疏水性增加，進(jìn)而協(xié)同抗真菌藥物抗真菌。此外，通過微量液基稀釋法篩查細(xì)胞壁相關(guān)基因缺失菌的菌庫，我們發(fā)現(xiàn)煙酰胺對細(xì)胞壁的影響與GIN4基因密切相關(guān)。
　　進(jìn)一步的，我們通過代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，煙酰胺能影響白念珠菌氨基酸代謝、三羧酸循環(huán)、氮代謝、糖酵解、磷酸戊糖途徑等。特別的，煙酰胺還能導(dǎo)致白念珠菌胞內(nèi)多胺含量的增多，而多胺與多胺合成抑制劑