Z染色體miRNAs在早期不同性別雞胚中的表達(dá)及miR-2954的功能分析.pdf

1、細(xì)胞自主性別決定學(xué)說認(rèn)為Z染色體基因的劑量決定雞的性別，但確切的決定因子還未知。已有研究表明性染色體miRNAs在哺乳動(dòng)物生殖發(fā)育方面有著重要作用。因此，我們推測(cè)雞Z染色體miRNA可能在雞性別決定及性分化中起著重要的調(diào)控作用。本研究在課題組前期工作基礎(chǔ)上，首先通過定量PCR的方法分析了10個(gè)Z染色體差異表達(dá)miRNAs在E2-E8.5的雌、雄雞胚或性腺中的時(shí)間表達(dá)模式，然后檢測(cè)了雄性高表達(dá)的miR-2954在E10.5雞胚各組織中的表

2、達(dá)模式，進(jìn)而通過雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)及miRNA超表達(dá)和抑制實(shí)驗(yàn)研究了miR-2954與靶基因的調(diào)控關(guān)系。本研究所取得的結(jié)果如下:
　　1.Z染色體miRNAs在早期雌、雄雞胚或性腺中的表達(dá)結(jié)果表明，miR-2954、novel-miR-66和novel-miR-37等七個(gè)miRNAs總體上表現(xiàn)為雄性高表達(dá)，miR-122-5p在E2.5-E4.5雞胚中為雄性高表達(dá)，而在E5.5-E8.5雞胚性腺中雌性高表達(dá)，miR-2131-

3、5p在E3-E6.5為雌性高于或顯著高于雄性;而miR-31-3p在整個(gè)時(shí)期表達(dá)規(guī)律不明顯，呈連續(xù)鋸齒狀變化。
　　2.miR-2954在雞胚中的發(fā)育及組織的表達(dá)譜結(jié)果表明，它在E2-E8.5雞胚及性腺中八個(gè)時(shí)期和E10.5雞胚八種組織中的表達(dá)均為雄性顯著或極顯著高于雌性。
　　3.通過軟件對(duì)miR-2954進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)，再結(jié)合靶基因功能分析以及miRNA-靶基因結(jié)合結(jié)構(gòu)分析，初步確定了YY1和FOXD1基因?yàn)閙iR-29

4、54的候選靶基因。并利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)對(duì)預(yù)測(cè)的靶基因進(jìn)行了初步驗(yàn)證，檢測(cè)結(jié)果說明YY1與FOXD1均為miR-2954的靶基因。
　　4.運(yùn)用定量PCR方法檢測(cè)了YY1基因在E2-E8.5雌、雄雞胚及E10.5雞胚各組織中的表達(dá)，結(jié)果表明YY1基因在整體上均為雌性高表達(dá)但兩性中差異不顯著，基本呈現(xiàn)與miR-2954表達(dá)趨勢(shì)相反的規(guī)律。
　　5.運(yùn)用定量PCR與western blot方法檢測(cè)了miR-2954超表達(dá)與