牙周炎對肥胖小鼠腎臟病變的影響及其機制探討.pdf

1、許多研究都已分別證實肥胖與慢性腎病具有相關性、牙周炎與慢性腎病具有相關關系。但尚缺乏在肥胖這種代謝異常狀態(tài)下牙周病對腎臟影響的直接證據(jù)。本研究使用牙周炎復合肥胖小鼠模型，旨在探討在肥胖狀態(tài)下，牙周炎是否對腎臟病變的產(chǎn)生存在影響及其可能的機制。為牙周炎是否影響腎臟疾病的發(fā)生尋找直接的證據(jù)。為臨床多學科聯(lián)合診斷，治療和預防提供依據(jù)。本文內容共分為三部分:
　　一、牙周炎對肥胖小鼠腎臟損害的影響
　　目的:建立飲食誘導型肥胖伴實驗

2、性牙周炎的小鼠模型，研究牙周炎對肥胖小鼠腎臟功能及腎臟病損是否存在影響。
　　方法:275只小鼠隨機分為高脂飼料組(HF組)和低脂飼料組（LF組）兩組。飼料誘導時間分為8周、16周、30周三個時間點。每個飼料誘導時間結束時，再將每個飼料組分為牙周炎組（P組）和非牙周炎組（對照組，C組），P組采用絲線結扎法誘導實驗性牙周炎，C組做假性結扎對照處理。處死小鼠取材。取30周小鼠，檢測血清腎功能指標血清總蛋白、白蛋白、血尿素氮、肌酐，并對

3、組織切片行HE染色及三種特殊染色（MASSON染色、PAS染色、改良六胺銀染色）。
　　結果:HF組比LF組血清總蛋白、白蛋白水平均有顯著下降。而HFP和HFC兩組間無明顯差異，同樣，LF組有無牙周炎干預（LFP和LFC），二者之間也沒有明顯差異。HFP組的血清肌酐明顯高于LFP和LFC，而HFC、LFP和LFC三組之間無明顯差異，HFP和HFC之間也無明顯差異。HF組的血清尿素氮數(shù)值偏高，但四組之間沒有統(tǒng)計學差異。腎組織病理改變

4、可見LFP組織學特征與LFC接近，表現(xiàn)為正常腎臟的組織學特點。HFP和HFC組小鼠可見腎小球局灶性毛細血管袢消失，系膜細胞增生，腎小球基底膜及球周纖維增生。腎小管上皮細胞玻璃樣或空泡變性，管間質纖維增生。以上病理特征在HFP組與HFC組小鼠情況近似，但HFP組的腎小管間質纖維增生更為嚴重。
　　結論:本研究成功建立了不同程度的飲食誘導型肥胖復合牙周炎的小鼠模型。正常小鼠患單純牙周病并不會導致腎臟損害，肥胖才是腎臟損害的主要因素。在

5、DIO30周這種嚴重肥胖的情況下，牙周炎可能會加劇腎小管間質纖維化的病變。
　　二、不同肥胖/牙周炎癥狀態(tài)下對腎臟損害的差異
　　目的:利用DIO8周、16周、30周及牙周感染5d、10d小鼠，探索在不同肥胖狀態(tài)下及不同牙周炎癥狀態(tài)下，牙周感染對肥胖小鼠腎臟損害的影響。
　　方法:對所有分組小鼠組織切片行HE染色及三種特殊染色（MASSON染色、PAS染色、改良六胺銀染色）。
　　結果:從DIO8周至16周至30

6、周，肥胖小鼠腎小球均有系膜細胞增生和毛細血管基底膜增厚，嚴重程度近似，但受累腎小球數(shù)目及范圍增加，腎小管上皮細胞均有空泡變性，范圍逐漸擴大。腎小球周纖維增生逐漸加重，腎小管間質纖維化程度加重、范圍加大。DIO16周小鼠牙周感染10d與5d腎臟病變無明顯區(qū)別，30周小鼠牙周感染10d比5d腎小管間質纖維化程度更加嚴重。
　　結論:隨著肥胖狀態(tài)增加，腎臟損害加重。可能在DIO30周這種重度肥胖狀態(tài)下，小鼠牙周感染時間越長，對腎小管間質

7、纖維化的影響越大。
　　三、牙周炎影響腎臟損害的可能機制
　　目的:檢測各組小鼠腎臟組織中TGF-β1，MMP-2，TIMP-1蛋白和基因轉錄水平的表達差異，進而探討肥胖狀態(tài)下時慢性牙周炎影響腎臟損害可能的病理機制。
　　方法:采用免疫組化檢測小鼠腎臟組織中TGF-β1，MMP-2，TIMP-1蛋白的表達，進行半定量分析，另采用實時定量PCR技術進行TGF-β1，MMP-2，TIMP-1mRNA基因表達差異分析。

8、>　　結果:免疫組化顯示，HFP、HFC、LFP、LFC四組腎臟組織中TGF-β1、TIMP1蛋白有統(tǒng)計學差異，每兩組均差異明顯，HFP組表達量最高。MMP2表達與之相反，LF兩組表達較高。實時定量PCR結果顯示，肥胖是主要影響因素，HFP、HFC、LFP、LFC四組之間TGF-β1、MMP2、TIMP1mRNA表達有統(tǒng)計學差異。
　　結論:在肥胖狀態(tài)下，牙周干預促進了腎臟組織TGF-β1、TIMP-1這兩個促進纖維化抑制降解蛋白