糖腎湯對實驗性糖尿病大鼠早期腎臟病變的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎病(Diabeticnephropathy，DN)是糖尿病(Diabetesmellitus，DM)的慢性并發(fā)癥之一，是DM患者過早死亡及生存質(zhì)量下降的主要原因，其發(fā)病率約占DM患者的35％～40％。而DM患者一旦進入臨床糖尿病腎病期(Ⅳ期)，出現(xiàn)持續(xù)性尿蛋白則病情不可逆轉(zhuǎn)，往往進行性發(fā)展至終末期腎功能衰竭，就失去了恢復(fù)的機會。因此早期發(fā)現(xiàn)、及早治療對改善其預(yù)后至關(guān)重要。近年來我們運用中醫(yī)學(xué)理論，研制出了益氣養(yǎng)陰、健脾去濕

2、的糖腎湯，在取得良好臨床療效的基礎(chǔ)上，進一步觀察該藥列DM大鼠早期腎臟病變的作用并探討其機制。 方法：取健康Wistar雄性大鼠40只，體重200±20g，常規(guī)飼料喂養(yǎng)。適應(yīng)喂養(yǎng)3天后隨機取10只為正常對照組(normalgroup，N)，余30只參照文獻用鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射(按65mg/kg)的方法復(fù)制糖尿病模型。注射48h后尾靜脈采血，隨機血糖＞16.65mmol/L為造模成功。

3、 將成模后的大鼠隨機分為糖尿病模型組(modelgroup，M)、糖腎湯治療組(treatmentgroup，T)、苯那普利對照組(controlgroup，C)三組，每組10只。各組于成模后即開始進行治療，糖腎湯治療組按28g/kg.d(相當于成人臨床用量的7倍)的劑量給予含2g/ml生藥的糖腎湯水煎液，苯那普利對照組按10mg/kg.d的劑量給予0.7mg/ml的苯那普利混懸液，正常組和模型組按14ml/kg.d的劑量給予飲用水，

4、4組均每日灌胃一次，連續(xù)治療8周，實驗期自由飲食、進水。每天觀察記錄大鼠的一般狀況。 最后一次給藥后，置大鼠于代謝籠中，收取隔夜12h尿，新鮮尿樣3000r/min離心15min，取上清液測尿微量白蛋白。在麻醉下，斷頭取血，4℃3500r/min離心15分鐘，分離血清，供相關(guān)指標檢測。無菌操作剪開胸腹腔，摘取雙腎，取小部分皮質(zhì)作電鏡標本，余腎組織用4％甲醛固定待作光鏡及免疫組化標本。 結(jié)果：1一般狀態(tài)觀察模型組大鼠腹腔注

5、射STZ后第2天，表現(xiàn)為煩躁、相互嘶咬，食量增加，尿量增多，尿液不如正常組清亮。成模后，造模各組大鼠表現(xiàn)為倦怠、行動緩慢、精神萎頓、蜷臥少動、毛枯體瘦，多飲、多食、多尿更加明顯，尿液較混濁。正常組則始終處于興奮、竄動狀態(tài)，未見明顯異常反應(yīng)。與正常組比較，造模各組大鼠體重明顯減輕，以造模8周時體重的增加幅度比較，正常組增加(148.23±9.31g)，模型組增加(13.13±7.35g)，治療組增加(54.36±8.54g)，對照組增加(

6、43.78±9.41g)，正常組與造模各組體重有明顯差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 2光鏡結(jié)果各糖尿病大鼠與正常組相比，均有腎小球體積增大、基底膜增厚、系膜基質(zhì)增多，其細胞外基質(zhì)相對面積明顯高于正常組(30±7)，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而治療組(35±5)和對照組(34±7)較模型組(46±9)有降低。 3電鏡結(jié)果M組腎小球基底膜不規(guī)則增厚，系膜區(qū)基質(zhì)增加，系膜區(qū)擴張伴致密物形成，足突不完全融合。N組腎

7、小球血管袢結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)皮細胞、系膜細胞和足細胞完整，足細胞的突起排列整齊，與基底膜垂直。T組和C組基底膜增厚、系膜區(qū)基質(zhì)增加、系膜區(qū)擴張較M組減輕。 4免疫組化結(jié)果TGF-β1在正常大鼠腎小球和腎小管的表達較弱，其PI值在各糖尿病組均較N組(2.2±0.9)明顯升高，經(jīng)治療后，T組和C組(3.4±1.3、3.4±1.1)均較M組(4.4±0.9)有明顯降低(P＜0.05)。 5PAS染色結(jié)果M組腎小球系膜區(qū)基質(zhì)明顯增多，

8、PAS染色強陽性，細胞增生。N組系膜區(qū)基質(zhì)略有增多，PAS呈淡染陽性，細胞不增生。T組和C組較M組有改善。 6各項檢查指標結(jié)果造模各組大鼠血糖均較正常組(4.62±1.16)明顯升高(P＜0.01)，經(jīng)用藥治療后，治療組大鼠血糖(17.85±1.15)較模型組(22.31±2.24)明顯降低(P＜0.05)，對照組大鼠高血糖(19.71±1.02)也得到緩解，與模型組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而治療組和對照組相比無統(tǒng)計

9、學(xué)意義(P＞0.05)。糖尿病大鼠存在腎臟肥大，與正常組(腎重/體重：2.49±4.02)有顯著性差異(P＜0.01)，經(jīng)用藥治療后，治療組和對照組腎重/體重分別為7.96±4.51、6.63±5.21，較模型組大鼠腎重/體重9.27±4.31明顯降低，兩組均能明顯減輕DM大鼠的腎臟肥大，有顯著性差異(P＜0.01)，而兩組之間相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 糖尿病各組大鼠血尿素氮、肌酐均在正常范圍，組間比較無顯著性差異(P

10、＞0.05)。 糖尿病各組大鼠尿微量白蛋白與正常組(11.18±1.24)存在顯著性差異(P＜0.01)，經(jīng)用藥治療后，治療組和對照組尿微量白蛋白分別為53.12±1.65、49.15±3.83，較模型組大鼠尿微量白蛋白(103.41±2.24)明顯減少，有顯著性差異(P＜0.05)，而兩組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 糖尿病各組大鼠甘油三脂的含量與正常組(0.40±0.02)存在顯著性差異(P＜0.01)，經(jīng)

11、用藥治療后，治療組甘油三脂的含量(1.03±0.09)較模型組和對照組(分別為2.88±0.53、2.45±0.61)明顯降低，有顯著性差異(P＜0.01)，而對照組和模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。 糖尿病大鼠血清中轉(zhuǎn)化生長因子-β1的含量較正常組(4.29±0.71)明顯升高，有顯著性差異(P＜0.01)，經(jīng)用藥治療后，治療組和對照組轉(zhuǎn)化生長因子-β1的含量(分別為9.47±1.55、9.32±1.12)較模型組(1