替米沙坦對單純性肥胖小鼠血清脂聯(lián)素、尿微量白蛋白及腎臟病理的作用.pdf

1、目的：肥胖目前是全球共存的一個嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。近年來肥胖的發(fā)病率大幅度增長，預(yù)測表明，2030年全球人口將有58％為超重或是肥胖。超重及肥胖可增加2型糖尿病、高血壓、心血管疾病及腎臟疾病發(fā)生的風(fēng)險。Weisinger早在1974年就已提出肥胖可導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生，即肥胖相關(guān)性腎?。∣RG）。已有多項研究證實，肥胖導(dǎo)致尿微量白蛋白（mALB）排泄增多與血清脂聯(lián)素（ADP）水平下降有關(guān)，給予過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）激動劑

2、吡格列酮干預(yù)后，血清ADP水平升高，尿mALB排泄減少。替米沙坦結(jié)構(gòu)與吡格列酮類似，多項研究證實替米沙坦也具有PPARγ激活作用，可提高血清ADP水平。本研究針對替米沙坦的PPARγ激活作用對單純性肥胖小鼠血清ADP、尿mALB排泄、腎臟PPARγmRNA表達水平、腎臟足細(xì)胞緊密連接蛋白-1（ZO-1）表達水平及腎臟病理改變的影響，探討替米沙坦作為PPARγ激動劑于ORG治療的意義。
　　方法：8周齡雄性ob/ob小鼠24只和其同

3、系C57BL/6J小鼠8只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，測量小鼠體質(zhì)量。ob/ob肥胖小鼠按其體質(zhì)量分層隨機分為三組：模型組（M組， n=8）、替米沙坦治療組（T1組，n=8）、氯沙坦治療組（T2組，n=8）；C57BL/6J小鼠為對照組（C組，n=8）。T1組給予替米沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃，T2組給予氯沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃，C組、M組小鼠予以等量蒸餾水灌胃。每周一早上8:00測定各組小鼠體質(zhì)量，根據(jù)小鼠體質(zhì)量調(diào)整給藥劑量，上

4、述步驟連續(xù)12周。實驗前后分別采集各組小鼠血液及24h尿液標(biāo)本，測定小鼠血糖、血清ADP及24h尿mALB。實驗結(jié)束12周末處死小鼠，摘取小鼠兩側(cè)腎臟并稱重。一側(cè)腎臟置于無菌凍存管于液氮中保存，實時熒光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，q-PCR）測定腎臟PPARγ mRNA表達水平；另側(cè)腎臟用10%中性甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色后于光鏡下觀察腎組織病理改

5、變，取10個正切的腎小球切面，測量腎小球直徑并取平均值；免疫組化方法檢測腎臟ZO-1表達水平。比較四組小鼠體質(zhì)量、血清ADP、24h尿mALB、腎臟PPARγmRNA表達水平、腎臟濕重、腎小球直徑及腎臟ZO-1表達水平的差異，并將血清ADP、24h尿mALB、腎臟PPARγmRNA表達水平、腎臟ZO-1表達水平與其他指標(biāo)行相關(guān)性分析。使用SPSS20.0軟件行數(shù)據(jù)處理及分析，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴實驗前ob/o

6、b小鼠及C57BL/6J小鼠體質(zhì)量、24h尿mALB及血糖比較：實驗開始前ob/ob小鼠平均體質(zhì)量顯著高于同系同周齡C57BL/6J小鼠（P<0.01），且ob/ob小鼠平均體質(zhì)量超過C57BL/6J小鼠平均體質(zhì)量的20%，達到小鼠肥胖標(biāo)準(zhǔn)。ob/ob小鼠24h尿mALB明顯高于C57BL/6J小鼠（P<0.01）。ob/ob小鼠及 C57BL/6J小鼠血糖水平存在差異（P<0.01），但實驗前后 ob/ob小鼠血糖均<16.7mmol

7、/L，排除小鼠糖尿病診斷，故可排除糖尿病所致的肥胖小鼠尿mALB增多，明確肥胖小鼠尿mALB由肥胖所致。⑵實驗前后各組小鼠體質(zhì)量比較：實驗前M組、T1組及T2組小鼠體質(zhì)量均超過C組小鼠體質(zhì)量（P<0.01）；M組、T1組及T2組小鼠體質(zhì)量無顯著性差異（P>0.05）。實驗后M組、T1組及T2組小鼠體質(zhì)量均明顯超過C組小鼠體質(zhì)量（P<0.01）；T1組小鼠體質(zhì)量低于M組及T2組（P<0.01）。M組及T2組小鼠體質(zhì)量無明顯差異（P>0.0

8、5）。⑶各組實驗前后比較：實驗后M組小鼠24h尿mALB較實驗前增加（P<0.01）；實驗后T1、T2組小鼠24h尿mALB較實驗前減少（P<0.01）；C組小鼠24h尿mALB較實驗前后無變化（P>0.05）。⑷各組小鼠之間比較：實驗前后M組、T1組及T2組小鼠24h尿mALB均明顯高于C組(P<0.01)；實驗后T1組、T2組小鼠24h尿mALB明顯低于M組小鼠(P<0.01，P=0.01)；T1組小鼠24h尿mALB明顯低于T2組

9、小鼠24h尿mALB(P=0.027)。⑸各組實驗前后比較：實驗后M組、T2組小鼠血清ADP水平較實驗前明顯降低（P<0.01）；實驗后T1組小鼠血清ADP水平明顯高于實驗前（P<0.01）；C組小鼠血清ADP水平無明顯變化（P>0.05）。⑹各組小鼠之間比較：實驗前后M組、T1組及T2組小鼠血清ADP水平均明顯低于C組(P<0.01)；實驗前M組、T1組及T2組小鼠血清ADP水平無明顯差異（P=0.174、P=0.183、P=0.97

10、3）；實驗后T1組小鼠血清ADP水平高于M組小鼠及T2組小鼠（P=0.003、P=0.005）；實驗后M組、T2組血清ADP水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.862）。⑺腎臟PPARγmRNA表達水平：M組、T1組、T2組小鼠PPARγmRNA表達水平均低于C組（P<0.01）；T1組小鼠腎臟PPARγmRNA表達水平高于M組小鼠（P=0.026）；T1組小鼠腎臟PPARγmRNA表達水平高于T2組小鼠（P=0.035）；T2組小鼠腎臟PP

11、ARγmRNA表達水平與M組小鼠差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.886）。⑻腎臟濕重（右腎）：C組小鼠腎臟濕重低于M組小鼠、T2組小鼠腎臟（P<0.01）；M組小鼠腎臟濕重高于T1組小鼠腎臟（P=0.005），與T2組小鼠腎臟濕重?zé)o明顯差異（P=0.377）。T1組小鼠腎臟濕重低于T2組小鼠腎臟（P=0.04）。⑼腎臟組織病理改變：光鏡下C組小鼠腎臟病理結(jié)果提示其腎小球、腎小管、內(nèi)皮細(xì)胞及系膜細(xì)胞均正常；M組、T2組小鼠腎臟病理提示腎小球細(xì)胞

12、數(shù)目明顯增加、腎小球肥大、體積增大，腎小球基底膜明顯增厚；系膜區(qū)明顯增寬，并可見系膜細(xì)胞及基質(zhì)增生，部分伴有局灶節(jié)段性腎小球硬化及間質(zhì)纖維化。T1組小鼠腎臟病理提示腎小球內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞基本正常，腎小球硬化程度較M組及T2組小鼠輕。⑽腎小球直徑：M組、T2組小鼠腎小球直徑明顯大于C組、T1組小鼠腎小球直徑（P<0.01）；T1組小鼠腎小球直徑小于T2組小鼠腎小球直徑（P<0.01）；T2組小鼠腎小與M組小鼠腎小球直徑無明顯差異（P=0

13、.945）。⑾腎臟ZO-1表達水平：M組及T2組小鼠腎臟ZO-1表達水平低于C組小鼠腎臟ZO-1表達水平（P<0.01）；T1組小鼠腎臟ZO-1表達水平低于C組小鼠腎臟ZO-1表達水平（P=0.079）；M組及T2組小鼠腎臟ZO-1表達水平低于T1組小鼠腎臟ZO-1表達水平（P<0.01）。⑿小鼠24h尿mALB與體質(zhì)量、右側(cè)腎臟濕重及腎小球直徑呈正相（r1=0.853、r2=0.631、r3=0.830；P1<0.01、P2<0.01

14、、P3<0.01），與血清 ADP水平、腎臟PPARγmRNA表達水平及腎臟ZO-1表達水平呈負(fù)相關(guān)（r4=-0.773、r5=-0.469、r6=-0.731；P4<0.01、P5=0.007、P6<0.01）。⒀小鼠血清ADP水平與腎臟PPARγmRNA與ZO-1表達水平呈正相（r7=0.434、r8=0.811；P7=0.013、P8<0.01），與小鼠體質(zhì)量、右側(cè)腎臟濕重、24h尿 mALB及腎小球直徑呈負(fù)相關(guān)（r9=-0.74

15、3、r10=-0.523、r4=-0.773、r11=-0.722；P9<0.01、P10=0.002、P4<0.01、P11<0.01）。⒁小鼠腎臟PPARγmRNA表達水平與血清ADP水平、腎臟ZO-1表達水平呈正相關(guān)（r7=0.434、r12=0.386；P7=0.013、P12=0.029），與小鼠體質(zhì)量、右側(cè)腎臟濕重、24h尿mALB及腎小球直徑呈負(fù)相關(guān)（r13=-0.381、r14=-0.340、r5=-0.469、r15=

16、-0.547；P13=0.034、P14=0.047、P5=0.007、P15=0.001）。⒂小鼠腎臟ZO-1表達水平與血清ADP水平、腎臟PPARγmRNA表達水平呈正相關(guān)（r8=0.811、r12=0.386；P8<0.01、P12=0.029），與小鼠體質(zhì)量、右側(cè)腎臟濕重、24h尿mALB及腎小球直徑呈負(fù)相關(guān)（r16=-0.770、r17=-0.493、r6=-0.731、r18=-0.787；P16<0.01、P17=0.00

17、4、P6<0.01、P18<0.01）。
　　結(jié)論：①肥胖小鼠24h尿mALB排泄量增加、血清ADP水平下降、腎臟PPARγmRNA及腎臟ZO-1表達水平下降；腎臟病理提示腎小球體積增大部分伴有局灶節(jié)段硬化。②替米沙坦及氯沙坦可通過改善腎臟血流動力學(xué)及非血流動力學(xué)效應(yīng)減少單純性肥胖小鼠24h尿mALB排泄量。③替米沙坦通過其特殊的PPARγ激活作用，提高單純性肥胖小鼠血清ADP水平、腎小球足細(xì)胞ZO-1表達增加并抑制腎小球肥大、減