尿液重金屬暴露譜檢測方法的建立及其在原發(fā)性男性不育研究中的應(yīng)用.pdf

1、不孕不育一直是生殖健康研究領(lǐng)域一個(gè)亟待解決的重大科學(xué)問題。近年來的研究表明，男性精液質(zhì)量顯著下降，精子生成障礙已成為男性不育最常見的病因。環(huán)境影響男性生殖的因素眾多，其中重金屬種類繁多，使用量日益增大，人群暴露譜面臨著日新月異的變化。很多重金屬被證實(shí)可以穿過血睪屏障，其對男性生殖健康的危害已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。然而到目前為止，重金屬暴露與健康效應(yīng)的研究仍局限于單一或者某類重金屬，難以客觀、全面地篩選當(dāng)前危害人類健康的主要重金屬暴露。故而本研

2、究關(guān)注重金屬混合暴露對男性生殖的影響，采用暴露譜的整體研究策略。
　　本研究通過優(yōu)化樣品前處理方法，建立尿液重金屬暴露譜研究方法，并使用一系列方法學(xué)評(píng)價(jià)過程對其進(jìn)行優(yōu)化和考察。所建方法不僅準(zhǔn)確性好，精密度高，更具有操作簡單，樣品需求小的特點(diǎn)，適用于大樣本人群的高通量分析。進(jìn)一步將此方法應(yīng)用于原發(fā)性男性不育研究，檢測了部分中國漢族男性人群尿液中重金屬元素內(nèi)暴露水平，探討了重金屬混合暴露與男性生殖健康風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)了鈷(Co)和鉬(

3、Mo)的增多可以增加原發(fā)性男性不育的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。這些研究為重金屬的潛在男性生殖毒性提供了人群流行病學(xué)證據(jù)和全新的認(rèn)識(shí)，為制訂成年男性重金屬尿液參考值的范圍提供了科學(xué)數(shù)據(jù)。
　　第一部分尿液重金屬暴露譜方法學(xué)的建立及評(píng)價(jià)
　　目的：
　　使用電感耦合等離子體質(zhì)譜，對尿液重金屬暴露譜進(jìn)行整體分析，通過條件優(yōu)化和方法評(píng)價(jià)，建立尿液中62種元素（包含48種重金屬）檢測技術(shù)。
　　方法：
　　通過樣品前處理，標(biāo)準(zhǔn)曲線配

4、制，內(nèi)標(biāo)選擇等建立尿液重金屬暴露譜方法，通過線性、準(zhǔn)確性、精密度等指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)已建立的尿液重金屬暴露譜方法。
　　結(jié)果：
　　在這62種元素中，元素的檢出限為0.00003μg/L-0.78768μg/L，線性范圍為0.005μg/L-200μg/L（常量元素為0.01 mg/L-200mg/L），回收率介于85-110％之間，日間和日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于12％。
　　結(jié)論：
　　與傳統(tǒng)元素定量分析相比，此暴露譜方

5、法可同時(shí)檢測62種元素，不僅操作簡單，樣品需求小，更具有高通量和無偏的特點(diǎn)。
　　第二部分尿液重金屬暴露譜與原發(fā)性男性不育的關(guān)聯(lián)性研究
　　目的：
　　運(yùn)用已建立的重金屬暴露譜方法，對原發(fā)性男性不育和正常對照的尿液進(jìn)行檢測分析，以發(fā)現(xiàn)其中的差異重金屬。
　　方法：
　　選擇596名原發(fā)性男性不育病例及366名對照晨尿樣本，進(jìn)行尿液重金屬暴露譜的檢測。建立多維模式識(shí)別模型，結(jié)合單維分析（秩和檢驗(yàn)、回歸分析），

6、尋找與原發(fā)性男性不育相關(guān)的差異重金屬，并明確重金屬混合暴露對原發(fā)性男性不育影響的交互作用。
　　結(jié)果：
　　秩和檢驗(yàn)結(jié)果顯示，原發(fā)性男性不育患者尿液中鈦(Ti)、錳(Mn)、鈷(Co)、銅(Cu)、硒(Se)、鍶(Sr)、鋯(Zr)鉬(Mo)、銀(Ag)、鐿(Yb)、鉭(Ta)、汞(Hg)的濃度較健康對照組有顯著差異（P＜0.05）。正交偏最小二乘判別分析(OPLSDA)模型中，Mo、Se、Ag、Co和Hg是貢獻(xiàn)差異的重金屬