Tregs對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺發(fā)生發(fā)展中Th免疫應(yīng)答的調(diào)控及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:矽肺是由于在生產(chǎn)過(guò)程中長(zhǎng)期吸入游離性二氧化硅粉塵引起的一種以肺部纖維化為主的職業(yè)性疾病。在我國(guó)矽肺病例占?jí)m肺總病例接近于50％，位居第一，是塵肺中危害最嚴(yán)重的一種疾病。雖然我國(guó)在控制游離性二氧化硅粉塵的產(chǎn)生和擴(kuò)散、降低作業(yè)場(chǎng)所二氧化硅粉塵濃度、改善勞動(dòng)環(huán)境方面做了大量工作，而且已取得了一定的成績(jī)，但其危害的形勢(shì)依然嚴(yán)峻，矽肺的預(yù)防和控制工作任重而道遠(yuǎn)。因此，進(jìn)行矽肺發(fā)病機(jī)制的研究對(duì)矽肺的預(yù)防及治療具有重要指導(dǎo)意義。
　　

2、矽肺的基本病理改變是矽結(jié)節(jié)形成和肺間質(zhì)彌漫性纖維化，其中矽結(jié)節(jié)是矽肺特征性的病理改變，按其纖維化程度可分為四級(jí)，即細(xì)胞性結(jié)節(jié)、纖維-細(xì)胞性結(jié)節(jié)、細(xì)胞-纖維性結(jié)節(jié)和纖維性結(jié)節(jié)，其纖維化程度隨時(shí)間進(jìn)展逐級(jí)增加。矽肺的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，目前對(duì)矽肺發(fā)病機(jī)制的研究認(rèn)為：矽肺是一種肺部的慢性炎癥狀態(tài)，可分為肺泡炎期和纖維化反應(yīng)期。肺泡炎期肺內(nèi)大量巨噬細(xì)胞被激活，釋放大量的細(xì)胞因子，其中炎癥因子可增加毛細(xì)血管的通透性，使大量中性粒細(xì)胞募集到肺組織

3、內(nèi)，同時(shí)巨噬細(xì)胞作為抗原遞呈細(xì)胞(antigen presentingcells，APC)使大量初始T淋巴細(xì)胞活化為效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，向肺內(nèi)炎癥部位遷移，分泌Th1型細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ等調(diào)控細(xì)胞免疫，其中IL-2通過(guò)自分泌和旁分泌效應(yīng)促進(jìn)更多T淋巴細(xì)胞分化、成熟和增殖；IFN-γ促進(jìn)巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的吞噬作用，表現(xiàn)為細(xì)胞性結(jié)節(jié)。纖維化反應(yīng)期效應(yīng)T淋巴細(xì)胞分泌Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-10等，促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放多肽生長(zhǎng)因子

4、，調(diào)控纖維母細(xì)胞的分化以及成纖維細(xì)胞的趨化作用、增殖及膠原的合成，同時(shí)抑制Th1型反應(yīng)，細(xì)胞性結(jié)節(jié)逐漸向纖維性結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)化。矽肺的發(fā)生過(guò)程是Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答到Th2型細(xì)胞免疫應(yīng)答的一個(gè)有序的過(guò)程，是一個(gè)多細(xì)胞參與多因子調(diào)控的復(fù)雜的免疫過(guò)程。雖然Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答的有效建立對(duì)肺內(nèi)游離二氧化硅粉塵的清除具有重要意義，但過(guò)度進(jìn)行卻使肺組織的正常結(jié)構(gòu)遭到破壞。
　　 近年來(lái)，一類以表達(dá)IL-17為特征的新CD4+T細(xì)胞亞群Th17細(xì)胞

5、引起了廣泛的關(guān)注。大量研究證實(shí)，Th17細(xì)胞在人類自身免疫性疾病如實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓膜炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、移植排斥，及嚴(yán)重的呼吸道過(guò)敏性炎癥性疾病等的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，特別是在炎癥發(fā)展早期發(fā)揮的促炎性作用，提示炎癥性疾病中T細(xì)胞免疫應(yīng)答的建立并不僅僅是一個(gè)由Th1型到Th2型的有序過(guò)程，在T細(xì)胞免疫應(yīng)答建立的早期可能存在著Th17型細(xì)胞免疫應(yīng)答。在實(shí)驗(yàn)性矽肺的發(fā)生發(fā)展中，由Th17型免疫應(yīng)答向Th1型免疫應(yīng)

6、答向Th2型細(xì)胞免疫應(yīng)答的適時(shí)轉(zhuǎn)化對(duì)于矽肺的發(fā)展及預(yù)后具有重要的影響，這一過(guò)程的啟動(dòng)或平衡出現(xiàn)紊亂都將導(dǎo)致疾病慢性化或正常肺組織的嚴(yán)重?fù)p傷，因此需要一種免疫調(diào)控機(jī)制對(duì)這一過(guò)程進(jìn)行有效的調(diào)控。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(CD4+CD25+regulatory T cells，簡(jiǎn)稱Tregs)是一類具有免疫調(diào)控功能的T淋巴細(xì)胞亞群，約占人和小鼠外周血CD4+T淋巴細(xì)胞的5％-10％。Tregs能夠特異地表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3(叉狀頭

7、/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子)和表面分子CD25(IL-2Rα)、CTLA-4(細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白-4)和GITR(糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體)。其中，F(xiàn)oxp3對(duì)Tregs的發(fā)育具有關(guān)鍵作用，是其特征性標(biāo)志。Tregs通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞直接接觸和間接抑制兩種方式發(fā)揮免疫學(xué)調(diào)控作用。其中，細(xì)胞-細(xì)胞直接接觸是通過(guò)其表面膜分子CD25、CTIA-4、GITR等的粘附作用及分泌穿孔素或顆粒酶依賴機(jī)制直接抑制或殺傷效應(yīng)細(xì)胞；間接抑制主要表現(xiàn)為

8、分泌細(xì)胞因子IL-10、TGF-β對(duì)其它細(xì)胞進(jìn)行免疫調(diào)控。其中IL-10主要通過(guò)抑制樹(shù)突狀細(xì)胞的MHCⅡ和共刺激因子的表達(dá)等機(jī)制抑制初始T細(xì)胞的活化，使獲得性免疫反應(yīng)受到抑制；通過(guò)抑制Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生、IgE的合成、肥大細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的生存與活化等機(jī)制來(lái)抑制Th2型反應(yīng)。另外，無(wú)論是在炎癥還是纖維化反應(yīng)階段過(guò)量表達(dá)IL-10都可以通過(guò)誘導(dǎo)IL-4和IL-13的表達(dá)發(fā)揮前纖維化活性。TGF-β是一個(gè)能調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、細(xì)胞外基

9、質(zhì)形成以及具有免疫抑制作用的蛋白家族。TGF-β可以抑制T細(xì)胞的活化，效應(yīng)細(xì)胞的殺傷活性；在Th1型免疫反應(yīng)中，TGF-β抑制INF-γ，TNF-α，IL-2的產(chǎn)生，對(duì)抗INF-γ，TNF-α的活性。
　　 Tregs在矽肺的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中怎樣調(diào)控Th1/Th2應(yīng)答和Th1/Th2極化的?影響Th1與Th2應(yīng)答的時(shí)效特征如何?機(jī)制如何?是否是通過(guò)抑制初始T細(xì)胞的活化或效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的活性調(diào)控免疫應(yīng)答?是否通過(guò)調(diào)控Th1/Th2極

10、化而影響矽肺的病理進(jìn)程?Tregs對(duì)矽結(jié)節(jié)形成的影響如何?作用機(jī)制如何?
　　 為回答上述問(wèn)題，我們擬利用鼠矽肺模型，特別是采用Tregs體內(nèi)阻斷實(shí)驗(yàn)，直接觀察Tregs在矽肺發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用地位，通過(guò)對(duì)比分析不同模型免疫應(yīng)答的變化特點(diǎn)，以期確立Tregs在矽肺Th應(yīng)答建立和Th1/Th2極化調(diào)控過(guò)程中相關(guān)的效應(yīng)機(jī)制，旨在為矽肺的預(yù)防和有效控制提供新的理論依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 1、建立不同Tregs

11、的C57BL/6小鼠矽肺模型C57BL/6小鼠(6-8w齡，雌性)經(jīng)腹腔注射100μg anti-CD25 mAb，消除小鼠體內(nèi)Tregs，建立抗體消除模型。單純矽肺模型組、對(duì)照組C57BL/6小鼠腹腔注射等體積的IgG1抗體?？贵w消除組、單純矽肺模型組、對(duì)照組C57BL/6小鼠分別行暴露式氣管內(nèi)注入法灌注二氧化硅顆粒懸液和生理鹽水。將不同Tregs的C57BL/6小鼠矽肺模型各組動(dòng)物分別于7，28，56天處死，收集BALF；收集肺門淋

12、巴結(jié)、脾組織，用于制備細(xì)胞懸液。摘取肺臟，部分-80℃保存；部分固定，用于病理實(shí)驗(yàn)。
　　 2、Tregs對(duì)矽肺炎性特征影響的觀察將不同時(shí)間各組動(dòng)物收集的BALF500r/min，4℃，離心10min，收集細(xì)胞懸液，取20ul細(xì)胞懸液至于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞數(shù)=(四個(gè)大格的細(xì)胞總數(shù)/4)×104。取400ul肺泡灌洗液，室溫1500rpm離心8min，棄上清，加入200ul FCS混勻，推片，室溫晾干，用甲醇固定，3

13、7℃溫箱過(guò)夜，用Giemsa染液染色，室溫15min；蒸餾水背沖，晾干。油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞中巨噬細(xì)胞，中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞的數(shù)量。
　　 3、Tregs對(duì)矽結(jié)節(jié)病理過(guò)程影響的動(dòng)態(tài)觀察肺組織常規(guī)石蠟切片(5μm)，進(jìn)行HE染色，石蠟切片放入烘箱內(nèi)烘烤2小時(shí)；然后將肺組織切片置于二甲苯中浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘；梯度酒精浸泡各1分鐘，脫去二甲苯；流水沖洗5分鐘；蘇木精染色液浸染10分鐘，自來(lái)水沖洗，返藍(lán)；2％鹽酸

14、酒精20秒至1分鐘；自來(lái)水沖洗12到24小時(shí)；0.5％伊紅染液浸染1至2分鐘，流水沖洗；梯度酒精脫水；二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。小鼠實(shí)驗(yàn)性矽肺采用四級(jí)分類法：未發(fā)生病變用“0”表示，Ⅰ級(jí)為細(xì)胞性結(jié)節(jié)；Ⅱ級(jí)為纖維細(xì)胞性結(jié)節(jié)；Ⅲ級(jí)為細(xì)胞纖維性結(jié)節(jié)；Ⅳ級(jí)為纖維性結(jié)節(jié)。
　　 4、不同小鼠模型中Tregs數(shù)量的觀察取0.1ml脾、肺門淋巴結(jié)、肺泡灌洗液細(xì)胞懸液(106細(xì)胞)，應(yīng)用anti-CD3-Percp，anti-CD4-PE-CY

15、7，anti-CD25-APC，4℃條件下避光孵育30min，3％FBS的PBS清洗細(xì)胞兩次，破膜液孵育細(xì)胞30min，再次清洗細(xì)胞兩次，應(yīng)用anti-FOXP3-FITC，anti-CTLA4-PE孵育細(xì)胞1hour，進(jìn)行胞內(nèi)染色。清洗后，加入1％多聚甲醛的PBS300ul，混勻，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀Diva軟件進(jìn)行分析。以FSC、SSC、anti-CD3-percp、anti-CD4-PE-cy7定義CD4

16、+T細(xì)胞，計(jì)算這一細(xì)胞群內(nèi)CD3+CD4+CD25+Foxp3+細(xì)胞的比例所占的比例。
　　 5、Tregs對(duì)Th應(yīng)答建立時(shí)效特征和效應(yīng)差異的影響取100mg肺組織，加入1ml Trizol試劑，冰浴勻漿，12000rpm離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至新管中，室溫靜置5分鐘；每管加入200μl氯仿，用力震蕩15秒，室溫靜置2-3分鐘；4℃，12000rpm，離心15分鐘；從每管中吸取上清至另一新的1.5ml EP管。加入等體積-20

17、℃預(yù)冷的0.5ml異丙醇，混勻后室溫沉淀10分鐘；4℃，12000rpm離心10分鐘后，棄上清；加入4℃預(yù)冷的75％乙醇，洗滌沉淀及離心管壁；4℃，7500rpm離心5分鐘，棄上清；室溫干燥5-10分鐘；加入30μlRNase-free水，至完全溶解，測(cè)定RNA濃度并調(diào)整至11μg/μl。參照Invitrogen公司的逆轉(zhuǎn)錄酶操作說(shuō)明書(shū)，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，即在PCR反應(yīng)管中加入逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，每管加入2μgRNA樣品和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液

18、。按下列條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：37℃15分鐘，85℃5秒鐘。設(shè)定程序?yàn)閮刹椒╮eal time定量，預(yù)變性90℃30秒，之后每一步變性95℃5秒，退火延伸60℃34秒，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)；相對(duì)定量法計(jì)算各組小鼠目標(biāo)基因IL-2、IL-4及IL-17mRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　 6、Tregs對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺Th免疫應(yīng)答調(diào)控機(jī)制的研究取0.1ml脾、肺門淋巴結(jié)(106細(xì)胞)，應(yīng)用anti-CD3-Percp，anti-CD4-PE-CY7，

19、anti-CD25-APC，4℃條件下避光孵育30min，3％FBS的PBS清洗細(xì)胞兩次，破膜液孵育細(xì)胞30min，再次清洗細(xì)胞兩次，應(yīng)用anti-FOXP3-FITC，anti-CTLA4-PE孵育細(xì)胞1hour，進(jìn)行胞內(nèi)染色。清洗后，加入1％多聚甲醛的PBS300ul，混勻，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀Diva軟件進(jìn)行分析。以FSC、SSC、anti-CD3-percp、anti-CD4-PE-cy7定義CD4+T

20、細(xì)胞，計(jì)算這一細(xì)胞群內(nèi)CD3+CD4+CD25+Foxp3+CTLA4+細(xì)胞數(shù)量。取100mg肺組織，加入1ml Trizol試劑，冰浴勻漿，12000rpm離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至新管中，室溫靜置5分鐘；每管加入200μl氯仿，用力震蕩15秒，室溫靜置2-3分鐘；4℃，12000rpm，離心15分鐘；從每管中吸取上清至另一新的1.5ml EP管。加入等體積-20℃預(yù)冷的0.5ml異丙醇，混勻后室溫沉淀10分鐘；4℃，12000rpm

21、離心10分鐘后，棄上清；加入4℃預(yù)冷的75％7，醇，洗滌沉淀及離心管壁；4℃，7500rpm離心5分鐘，棄上清；室溫干燥5-10分鐘；加入30μl RNase-free水，至完全溶解，測(cè)定RNA濃度并調(diào)整至1μ/μl。參照Invitrogen公司的逆轉(zhuǎn)錄酶操作說(shuō)明書(shū)，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，即在PCR反應(yīng)管中加入逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，每管加入2μgRNA樣品和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液。按下列條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：37℃15分鐘，85℃5秒鐘。設(shè)定程序?yàn)閮刹?/p>

22、法real time定量，預(yù)變性90℃30秒，之后每一步變性95℃5秒，退火延伸60℃34秒，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)；相對(duì)定量法計(jì)算各組小鼠目標(biāo)基因IL-10、TGF-βmRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　 7、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析全部數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表示為mean士S.E.M，采用單因素方差分析比較各組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；當(dāng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，用SNK法進(jìn)行組間比較，p<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

23、
　　 1、腹腔注射CD25抗體有效的消除了小鼠體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抗體消除組小鼠腹腔注射抗CD25單克隆抗體，對(duì)照組及模型組小鼠腹腔注射抗IgG1抗體，經(jīng)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)，染塵后7天、28天、56天抗體消除組小鼠脾組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例較模型組、對(duì)照組顯著降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腹腔注射CD25抗體有效的消除了小鼠體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。
　　 2、不同組別小

24、鼠肺泡灌洗液炎性細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果染塵后7天，抗體消除組小鼠肺泡灌洗液細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)較模型組升高，兩者均高于對(duì)照組，抗體消除組小鼠肺泡灌洗液淋巴細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞數(shù)與模型組無(wú)明顯差異，兩者均高于對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。染塵后28天，模型組小鼠淋巴細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞數(shù)量高于抗體消除組，兩者均高于對(duì)照組。模型組與抗體消除組中性粒細(xì)胞無(wú)明顯差異，兩者均高于對(duì)照組。染塵后56天，模型組淋巴細(xì)胞數(shù)高于抗體消除組，兩者均高于對(duì)照組?？贵w消除組細(xì)

25、胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞數(shù)和模型組無(wú)明顯差異，兩者均高于對(duì)照組。
　　 3、Tregs對(duì)矽結(jié)節(jié)病理過(guò)程影響的動(dòng)態(tài)觀察矽肺組7天肺組織病理觀察炎性細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)，肺泡間隔增厚，可見(jiàn)不規(guī)則的細(xì)胞性結(jié)節(jié)。28天矽肺組肺組織炎癥明顯減輕，細(xì)胞性結(jié)節(jié)較7天變大，數(shù)量增多，可見(jiàn)纖維細(xì)胞性結(jié)節(jié)。56天矽肺組肺組織炎癥基本消退，纖維細(xì)胞性結(jié)節(jié)增多，可見(jiàn)細(xì)胞纖維性結(jié)節(jié)。抗體消除組小鼠7天炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯較矽肺組重，肺間隔明顯增厚，可見(jiàn)較多不規(guī)則

26、的細(xì)胞性結(jié)節(jié)。28天抗體消除組炎癥減輕，細(xì)胞性結(jié)節(jié)較7天略有增大，數(shù)量無(wú)明顯增多，結(jié)節(jié)中細(xì)胞略有減少。56天抗體消除組肺組織炎癥明顯減輕，可見(jiàn)不規(guī)則的細(xì)胞性結(jié)節(jié)和纖維細(xì)胞性結(jié)節(jié)。生理鹽水組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)基本正常，未見(jiàn)明顯病理改變。
　　 4、小鼠染塵后不同組織中Tregs數(shù)量的變化染塵后7天，模型組小鼠脾、肺門淋巴結(jié)、肺泡灌洗液中Tregs/CD4+比例高于對(duì)照組，兩者均高于抗體消除組。染塵后28天，模型組小鼠脾、肺門淋巴結(jié)Tr

27、egs/CD4+細(xì)胞的比例與對(duì)照組無(wú)明顯差異，兩者均高于抗體消除組，肺泡灌洗液中Tregs/CD4+比例高于對(duì)照組，兩者均高于抗體消除組。染塵后56天，模型組小鼠脾Tregs/CD4+細(xì)胞的比例略高于對(duì)照組，差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩者均高于抗體消除組；模型組與抗體消除組肺門淋巴結(jié)中Tregs/CD4+細(xì)胞的比例較對(duì)照組降低；模型組小鼠肺泡灌洗液中Tregs/CD4+比例高于對(duì)照組，兩者均高于抗體消除組。模型組小鼠脾、肺門淋巴結(jié)中Tregs

28、/CD4+細(xì)胞的比例隨時(shí)間成下降趨勢(shì)。
　　 5、Tregs對(duì)Th應(yīng)答建立時(shí)效特征和效應(yīng)差異的影響染塵后7天，模型組及抗體消除組小鼠肺組織中IL-2mRNA的含量較對(duì)照組升高。染塵后28天及染塵后56天，模型組小鼠肺組織中IL-2mRNA的含量與對(duì)照組無(wú)明顯差異，兩者均低于抗體消除組IL-2mRNA的含量差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組小鼠IL-2mRNA的含量成降低趨勢(shì)；染塵后7天，模型組及抗體消除組小鼠肺組織中IL-4mRNA的含量

29、與對(duì)照組無(wú)明顯差異。染塵后28天，模型組小鼠肺組織中IL-4mRNA的含量較抗體消除組及對(duì)照組升高，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。染塵后56天，模型組小鼠肺組織中IL-4mRNA的含量，較抗體消除組高，兩者均高于對(duì)照組。模型組、抗體消除組小鼠IL-4mRNA的含量隨時(shí)間升高，模型組小鼠升高較抗體消除組更為顯著；染塵后7天，模型組較抗體消除組小鼠肺組織中IL-17mRNA的含量升高，兩者均高于對(duì)照組。染塵后28天，模型組小鼠肺組織中IL-17mRN

30、A的含量較抗體消除組及對(duì)照組升高。染塵后56天，模型組小鼠肺組織中IL-17mRNA的含量，較抗體消除組)高，兩者均高于對(duì)照組。模型組、抗體消除組小鼠IL-17mRNA的含量隨時(shí)間降低。
　　 6、Tregs對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺Th免疫應(yīng)答調(diào)控機(jī)制的研究染塵后7天，模型組小鼠脾、肺門淋巴結(jié)CTLA4細(xì)胞的數(shù)量較對(duì)照組升高，兩者均高于抗體消除組，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。染塵后28天，模型組小鼠脾CTLA4細(xì)胞的數(shù)量較對(duì)照組升高，兩者均高于抗體

31、消除組；模型組小鼠淋巴結(jié)CTLA4細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組無(wú)明顯差異，兩者均高于抗體消除組。染塵后56天，模型組小鼠脾組織中CTLA4細(xì)胞的數(shù)量與對(duì)照組無(wú)明顯差異，兩者均高于抗體消除組；模型組小鼠淋巴結(jié)CTLA4細(xì)胞數(shù)量與抗體消除組無(wú)明顯差異，均低于對(duì)照組。模型組小鼠脾、肺門淋巴結(jié)中CTLA數(shù)量隨時(shí)間降低。抗體消除組和對(duì)照組脾、肺門淋巴結(jié)中CTLA數(shù)量隨時(shí)間無(wú)明顯變化；模型組小鼠肺組織中IL-10mRNA的含量較抗體消除組與對(duì)照組顯著升高。模型

32、組小鼠肺組織IL-10mRNA的表達(dá)量隨時(shí)間升高，染塵后56天與染塵后7天差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；染塵后7天，模型組小鼠肺組織中TGF-βmRNA的含量略高于抗體消除組與對(duì)照組，差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。染塵后28天，模型組與抗體消除組小鼠肺組織中TGF-βmRNA的含量較對(duì)照組高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。染塵后56天，模型組小鼠肺組織中TGF-βmRNA的含量，較抗體消除組及對(duì)照組升高。模型組小鼠TGF-βmRNA的含量隨時(shí)間升高，染塵后56天與染塵后