KCNQ1在尿酸鹽晶體引起單核巨噬細(xì)胞分泌IL-1β中的作用研究.pdf

1、目的：探討鉀離子通道蛋白KCNQ1在尿酸鹽晶體刺激人單核巨噬細(xì)胞分泌IL-1β中可能的作用。
　　方法：以濃度為60μg/ml的丙二醇甲醚醋酸酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）誘導(dǎo)人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系(human acute monocytic leukemia cell line，THP-1)，誘導(dǎo)時(shí)間為72h，得到人單核巨噬細(xì)胞。熒光定量PCR檢測(cè)人單核巨噬細(xì)胞中KCNQ1輔基K

2、CNE1是否表達(dá)，及相對(duì)于KCNQ1的表達(dá)量。將實(shí)驗(yàn)分成4組：對(duì)照組、尿酸鹽晶體組、尿酸鹽晶體和通道激活劑（ML-277,20nmol/ml）組、尿酸鹽晶體和通道阻滯劑（Chromanol293B,100nmol/ml）組。各實(shí)驗(yàn)組中尿酸鹽晶體的量均為：100μg/ml。在每組加入相應(yīng)阻滯劑或抑制劑預(yù)處理30min后，期間每10分鐘晃動(dòng)一次，以保持作用充分。之后，實(shí)驗(yàn)組加入等量尿酸鹽晶體。6h后，應(yīng)用ELISA法檢測(cè)上清液中成熟IL-1

3、β的濃度，應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)IL-1β前體、IL-18前體、TNF-α的表達(dá)量。刺激2h后，去上清,用10%的硝酸溶解消化細(xì)胞，應(yīng)用原子吸收分光光度計(jì)檢測(cè)每孔細(xì)胞內(nèi)鉀離子的量；應(yīng)用ATP試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ATP的濃度。
　　結(jié)果：輔基KCNE1在該細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)，且表達(dá)量明顯高于KCNQ1.尿酸鹽晶體刺激6h后，上清液中成熟IL-1β的濃度，通道激活劑組與尿酸鹽晶體組相比明顯升高（P＜0.01），而該通道阻滯劑組與尿酸鹽晶

4、體組相比無明顯差異。細(xì)胞內(nèi)IL-1β前體、IL-18前體、TNF-α表達(dá)量，各實(shí)驗(yàn)組間無明顯差異。尿酸鹽晶體刺激2h后，細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度，激活劑組與尿酸鹽晶體組相比，細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度進(jìn)一步下降（P＜0.01），阻滯劑組略高于尿酸鹽晶體組，但在目前實(shí)驗(yàn)條件下，我們沒有觀察到這一差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)ATP的含量明顯低于對(duì)照組，各實(shí)驗(yàn)組之間無明顯差異。
　　結(jié)論：1.正常狀態(tài)下，KCNQ1鉀離子通道在尿酸鹽晶體刺激人單核巨噬細(xì)