FISH技術(shù)驗證毛冠鹿Y染色體及核型多態(tài)機理初步研究.pdf

1、自二十世紀八十年代開始就有關(guān)于毛冠鹿的研究報道。毛冠鹿種內(nèi)核型存在多態(tài)現(xiàn)象，到2002年為止在毛冠鹿種內(nèi)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了5種不同的核型，不同核型間的差別主要集中在幾條異染色質(zhì)豐富的染色體上。對不同核型中性染色體的確定曾有不同的觀點。另外，關(guān)于毛冠鹿種內(nèi)核型的多態(tài)現(xiàn)象是否是亞種間的差異或者個體差異，以及這種多態(tài)現(xiàn)象產(chǎn)生的機制如何等問題仍未能得到很好的解釋。為了對毛冠鹿的性染色體進行驗證并進一步探討上述問題做了如下工作： 1)通過顯微切割

2、技術(shù)獲得赤麂Y<,2>單條染色體，經(jīng)LA-PCR擴增模板量，然后通過PCR法制備地高辛標記的涂染探針，并通過Southern blot對該探針進行驗證。設(shè)計引物在毛冠鹿基因組中擴增Sry基因全長，測序驗證之后通過PCR法制備熒光素標記的Sry基因探針。利用這兩種探針分別對雄性毛冠鹿的中期染色體進行原位雜交，涂染探針的雜交得到了陽性結(jié)果。結(jié)合本實驗室的基因定位研究對毛冠鹿的Y染色體進行了驗證。 2)采用原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)方法對來

3、自成都動物園的8頭毛冠鹿的皮膚細胞進行了染色體研究，結(jié)果出現(xiàn)4種不同的核型，有一種核型與以前所報道的幾種核型不一致，確定為新核型(2n=47♀，X染色體為異型， )。至此，在毛冠鹿種內(nèi)共發(fā)現(xiàn)了6種不同的核型。根據(jù)核型圖、C-帶及薄層掃描結(jié)果分析了毛冠鹿種內(nèi)染色體多態(tài)的表現(xiàn)形式、遺傳規(guī)律及可能的產(chǎn)生機制。 3)通過PCR法制備熒光素標記的著絲粒序列探針，然后分別對4種不同核型的毛冠鹿中期染色體進行熒光原位雜交，結(jié)果在4種不同核型