組蛋白乙?；隗w細胞克隆牛肺臟中的研究.pdf

1、1997年克隆羊"多莉"誕生之后,大批的克隆動物如鼠、牛、羊和豬等相繼問世,但遺憾的是克隆的成功率迄今為止仍然很低.大量的研究表明,克隆動物在核移植后其染色質的再程序化表現(xiàn)異常,使細胞不能成功地通過調節(jié)轉錄活性而有效地控制其發(fā)育分化.這些染色質的再程序化包括DNA的甲基化和核小體組蛋白的乙?；?組蛋白乙?；谌旧|結構調節(jié)、DNA復制、基岡轉錄、細胞分化及癌細胞發(fā)育都有研究,但在克隆動物中卻是一個有待深入探索的領域.在報道的克隆牛發(fā)育

2、異常中,肺臟的異常比較普遍和明顯,而在我們的克隆牛工作中也發(fā)現(xiàn)了類似問題,所以我們選用克隆牛肺臟組織作為實驗材料,進行組蛋白乙?；芯?在我們的克隆牛組蛋白乙?；瘜嶒炛?使用組蛋白乙酰化免疫沉淀反應技術和定量PCR技術,共分析了18個樣品和15個基岡,這些樣品包括9N1,9N3,9N4,8C1,8C2,8C3,8C4,9C1,9C2,9C3,9C4,9C5,9C6,9C8,9C12,Jiumei,Benben和Xiaobai等;這些基因

3、包括β-Actin,BMP4,EGF,FGF,FGFBP,FGFR,GH,GHR,Gli2,HGF,HGFR,IGF1,RAR,SHH和VEGF等.我們發(fā)現(xiàn):(1)在克隆牛中組蛋白乙?；交旧隙加兴档?(2)克隆牛Xiaobai乙?；奖日Ｅ５?而基本上是高于或接近死亡克隆牛水平的;(3)在我們所研究的三個供體細胞系(卵丘細胞,成體成纖維細胞和胎兒成纖維細胞)中,乙酰化水平無明顯差異.我們還分析了相關生長因子在克隆牛中的表達狀

4、況,共分析了13個樣品和7個基因,這些樣品包括9N1,9N3,9N4,8C1,9C3,9C4,9C5,9C6,9C8,9C12,Jiumei,Benben和Xiaobai等;基岡包括BMP4,FGF10,FGFBP,FGFR,IGF1,SPA和VEGF等.我們發(fā)現(xiàn)基因表達的水平變化較大,有些基因的表達水平提高了,如BMP4,IGF1,SPA和VEGF,而有些有所降低,如FGF10,FGFBP和FGFR等.對克隆牛中組蛋白乙酰化水平和基岡

5、在克隆牛中的表達水平對比分析,我們發(fā)現(xiàn)兩者并沒有某種一致的聯(lián)系.組蛋白乙?；诨蛘{節(jié)中只是提供了一個微環(huán)境,屬于粗略調節(jié),只要具備一定的水平即可進一步引發(fā)其他因子的參與,來精確調節(jié)基岡的表達.而在克隆牛中組蛋白乙?；诫m然有所降低,但如果這種降低仍然為基因的表達提供了足夠的基礎,這就對基因的正常表達造不成很大影響;但如果組蛋白乙?；竭^高或過低,可能要影響到其他因子的作用,從而影響了基因表達的調節(jié),最終導致生物個體發(fā)育異常.為研究

6、基因不同區(qū)域的組蛋白乙?；?我們選取了正常牛4N1,6N1,9N3,克隆牛Xiaobai和9C4共五個樣品,IGFI和GH兩個基岡作為研究對象,在它們的基因序列上分別設計了14對和8對引物來進行定量分析.通過我們的實驗,我們認為無論基因表達與否,都首先在其基因組上維持了一定的組蛋白乙?；?這種乙酰化水平同時也是一個整體的概念,而且在不同的基因區(qū)域上,組蛋白乙?；绞怯幸欢ǖ牟▌有?另外這種乙?；娇梢噪S著發(fā)育階段的不同根據(jù)基