組蛋白去乙?；种苿═SA）影響體細(xì)胞克隆胚早期發(fā)育過(guò)程的初步研究.pdf

1、目前，核移植效率的低下和克隆動(dòng)物發(fā)育成功率低是影響體細(xì)胞克隆技術(shù)廣泛應(yīng)用的主要瓶頸。研究認(rèn)為，產(chǎn)生這些問(wèn)題的主要原因是供體核染色質(zhì)與受體卵質(zhì)之間互作異常、影響體細(xì)胞染色質(zhì)解聚和激活表達(dá)程序出現(xiàn)紊亂有關(guān)。本試驗(yàn)采用組蛋白去乙?；柑禺愋砸种苿㏕SA(trychostatin A)能夠抑制重構(gòu)胚早期組蛋自去乙?；淖饔锰攸c(diǎn)，對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育早期的不同階段進(jìn)行TSA處理,觀察其對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育狀況的影響，以揭示組蛋白乙?；苋ヒ阴；饔迷诤藘?nèi)染色質(zhì)重

2、編程過(guò)程中所發(fā)揮的作用，進(jìn)而為闡釋重編程過(guò)程中后成記憶的修飾和固定機(jī)制提供重要依據(jù),同時(shí)也試圖探尋一條能夠提高核移植效率的新途徑。 試驗(yàn)一：TSA濃度對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響。本試驗(yàn)旨在選擇合適的TSA處理濃度,按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分成四組不同的TSA濃度，分別為0.5nM、5nM、50nM、500nM，處理時(shí)間為1Ch。結(jié)果發(fā)現(xiàn),50nM的TSA濃度的囊胚率(23.96％)要顯著高于其他三組(11.76％、14.29％、8.57％)和對(duì)照組

3、(11.94％)，它們之間差異顯著(P＜0.05)，說(shuō)明50nMTSA可以在最小程度傷害重構(gòu)胚的情況下最大限度的實(shí)現(xiàn)對(duì)組蛋白去乙?；?HDAC)的抑制，促進(jìn)組蛋白的乙?；?，從而達(dá)到明顯提高重構(gòu)胚發(fā)育的目的。 試驗(yàn)二：融合階段組蛋白乙?；苋ヒ阴；瘜?duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響。本試驗(yàn)旨在確定融合階段組蛋白乙?；苋ヒ阴；瘜?duì)重構(gòu)胚的核程序重排及其發(fā)育效果的影響作用。設(shè)計(jì)了兩組試驗(yàn)，分別為T3K6組和K3K6組。結(jié)果顯示，K3K6組與T3K6

4、組在二細(xì)胞率(81.82％vs83.18％)和囊胚率(18.19％vs21.45％)，兩個(gè)指標(biāo)差異均不顯著(P＞0.05)。說(shuō)明在融合階段通過(guò)抑制組蛋白去乙?；饔貌⒉荒茱@著改善重構(gòu)胚的發(fā)育狀況，對(duì)重構(gòu)胚的核程序重排并沒(méi)有直接的作用。 試驗(yàn)三：激活階段組蛋白乙?；苋ヒ阴；瘜?duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響，本試驗(yàn)旨在確定在激活階段組蛋白乙?；苋ヒ阴；瘜?duì)重構(gòu)胚的核程序重排及其發(fā)育效果的影響。試驗(yàn)設(shè)計(jì)了三組，分別為K3T 6組、K3K6組和T3

5、T6組。結(jié)果顯示，K3T6和T3T6組的二細(xì)胞率(90.52％，91.04％)和囊胚率(29.31％，32.54％)都明顯高于K3K6組(80.41％，21.65％)。兩者之間差異顯著(P＜0.05)：而K3T6組和T3T6組之間在二細(xì)胞率(90.52％vs91.04％)和囊胚率(29.31％vs32.54％)上的差異則不顯著(p＞0.05)。說(shuō)明在激活階段通過(guò)抑制組蛋白的去乙酰化作用可以明顯提高重構(gòu)胚的發(fā)育效率。試驗(yàn)四：延長(zhǎng)激活時(shí)間和

6、激活階段TSA處理的時(shí)間對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響。本試驗(yàn)旨在觀察不同的激活時(shí)間及不同的TSA處理時(shí)間是否會(huì)對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育產(chǎn)生影響。共設(shè)計(jì)四組試驗(yàn)，分別為K2K6組、K2K9組、T2T6組和T2T9組。結(jié)果顯示，K2K6組和K2K9組在二細(xì)胞率(83.51％vs86.89％)及囊胚率(18.56％vs19.67％)上的差異并不顯著(P＞0.05)；T2T6組和T2T9組之間在二細(xì)胞率(87.38％vs88.34％)和囊胚率(31.06％vs34.

7、19％)的發(fā)育上的差異也不顯著(P＞0.05)。說(shuō)明延長(zhǎng)激活時(shí)間和在激活階段延長(zhǎng)TSA的處理時(shí)間并不能顯著提高重構(gòu)胚的發(fā)育狀況。 結(jié)論：(1)在用TSA處理重構(gòu)胚時(shí)，其濃度以50nM為宜。(2)在重構(gòu)胚的融合階段，TSA的處理并沒(méi)有對(duì)重構(gòu)胚的發(fā)育狀況產(chǎn)生顯著的影響作用，說(shuō)明在融合階段組蛋白的脫乙酰化作用對(duì)重構(gòu)胚的發(fā)育沒(méi)有影響。(3)在重構(gòu)胚的激活階段，通過(guò)TSA的處理可以顯著提高重構(gòu)胚的發(fā)育效率，說(shuō)明該階段重構(gòu)胚的激活與TSA誘