決明子中蒽醌化合物組成和功能的研究.pdf

1、決明子是豆科植物決明(CassiaobtusifoliaL.)或小決明(CassiatoraL.)的成熟干燥種子，為藥食同源中草藥。決明子在我國種植面積廣泛，具有清肝明目、潤腸通便和調(diào)壓降脂的作用，是我國衛(wèi)生部首批公布的藥食同源食物之一。蒽醌化合物是決明子中主要的功效成分，具有抗氧化、抑菌、抗突變等多種藥理活性，在醫(yī)藥、保健品和食品添加劑等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。故本課題選擇決明子作為研究對象，對決明子中的主要功效成分進行分離和鑒定，研究蒽醌化合

2、物的體外抗氧化和抗誘變活性，為合理開發(fā)利用決明子資源提供理論依據(jù)。 采用柱層析的方法對決明子中的蒽醌化合物進行分離，通過化學(xué)和波譜分析方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。分離得到9種蒽醌類化合物，分別鑒定為大黃酚(Ⅰ)、大黃素甲醚(Ⅱ)、8-甲氧基大黃酚(Ⅲ)、大黃素(Ⅳ)、黃決明素(Ⅴ)，8-甲氧基大黃素(Ⅵ)、2-甲氧基大黃酚-8-O-β-D-比喃葡萄糖苷(Ⅶ)，4，6，7-三甲氧基蘆薈大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅷ)，大黃素-

3、6-O-β-龍膽二糖苷(Ⅸ)?；衔铫?、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ均為首次從該植物中分得。 通過單因素以及正交試驗，得到?jīng)Q明子中蒽醌化合物最佳提取工藝：乙醇濃度70％(v/v)，溫度50℃，固液比1∶25，提取時間為1.5小時，蒽醌得率為8.05mg/g原料。采用堿溶-酸沉的方法對粗提物中蒽醌化合物進行分離，NaOH溶液濃度為0.5％、固液比為1∶15下提取，在pH值為2的條件下沉淀，得到黃色粉末狀蒽醌提取物，含量達到65.4％。決明子在1

4、50℃加熱過程中總蒽醌含量基本不變，游離蒽醌含量顯著增加，結(jié)合蒽醌(糖苷)的量明顯降低。利用HPLC對加熱過程中9種蒽醌化合物的含量變化進行了分析。推斷蒽醌糖苷化合物的糖苷鍵會受熱分解，轉(zhuǎn)變?yōu)檩祯赵?采用亞油酸過氧化、Cu2+誘導(dǎo)的低密度脂蛋白(LDL)氧化、還原力和螯合過渡金屬離子等試驗，研究了大黃酚、大黃素甲醚、8-甲氧基大黃酚、大黃素、黃決明素和8-甲氧基大黃素的體外抗氧化作用。實驗結(jié)果表明各化合物在12.5-50mm

5、ol/L的濃度范圍內(nèi)，可以抑制AIBN引發(fā)的亞油酸過氧化。通過對反應(yīng)體系的紫外可見吸收光譜變化的分析，推斷各蒽醌化合物通過兩種不同方式捕獲自由基，抑制氧化反應(yīng)的發(fā)生。各蒽醌化合物在高濃度均可抑制Fe2+引發(fā)的亞油酸過氧化，但大黃酚在低濃度時表現(xiàn)為促氧化作用。蒽醌化合物對AIBN和Fe2+引發(fā)的亞油酸過氧化的抑制作用均較BHT弱。還原力實驗結(jié)果表明黃決明素、8-甲氧基大黃素和8-甲氧基大黃酚表現(xiàn)出明顯的還原能力，在相同濃度下，黃決明素還原

6、能力最強，而大黃酚、大黃素甲醚和大黃素的還原力較弱。實驗結(jié)果還表明各蒽醌化合物可以抑制Cu2+誘導(dǎo)的LDL氧化，提示其可能具有潛在的預(yù)防動脈粥樣硬化的功能。通過紫外可見吸收光譜分析，推斷大黃酚、大黃素甲醚、大黃素和8-甲氧基大黃素可以通過螯合Cu2+來抑制LDL氧化。 采用單細胞凝膠電泳的方法，以尾矩(Olivetailmoment，OTM)作為評價指標，對決明子中游離蒽醌化合物的遺傳毒性和對苯并(a)芘誘導(dǎo)的倉鼠卵巢(CHO)

7、細胞DNA損傷的保護作用進行研究。實驗結(jié)果表明，在2.5-20mmol/L濃度范圍內(nèi)，大黃素甲醚、8-甲氧基大黃酚、黃決明素和8-甲氧基大黃素沒有表現(xiàn)出遺傳毒性，大黃酚和大黃素在高濃度下(20mmol/L)可能具有一定的遺傳毒性。各蒽醌化合物在一定濃度下均可抑制苯并(a)芘對細胞DNA的損傷，提示具有一定的抗誘變活性。各蒽醌化合物不能提高細胞對DNA損傷的修復(fù)能力，實驗結(jié)果提示蒽醌化合物可能是通過抑制苯并(a)芘的代謝活化或與致癌物直接

8、反應(yīng)來起到保護細胞DNA的作用。 對決明子中的自由基清除活性成分進行了研究。采用硅膠柱層析、TLC和制備HPLC等分離方法，以N,N-二苯基三硝基苯肼自由基[DPPH·]清除活性作為檢測指標，從決明子乙醇提取物中篩選分離得到自由基清除活性成分F-A-1和F-A-2，利用NMR對化合物結(jié)構(gòu)進行了初步鑒定，如下： 化合物F-A-1化合物F-A-2利用體外實驗方法對F-A-1和F-A-2的自由基清除活性進行了研究。實驗結(jié)果表明