PDMA-b-PEO-b-PDMA的合成及其用于毛細(xì)管電泳分離蛋白質(zhì)的研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis，CE)由于其分離速度快，分離效率高，及樣品消耗量少等特點(diǎn)，成為多肽、蛋白質(zhì)、DNA和氨基酸等生物分子分離的一個(gè)有力工具，并在生物工程、醫(yī)學(xué)藥物等生命科學(xué)領(lǐng)域以及食品檢測(cè)等領(lǐng)域顯示了極其重要的應(yīng)用前景。但是毛細(xì)管表面的硅羥基(Si-OH)電離為Si-O-，使得毛細(xì)管電泳分離蛋白質(zhì)過(guò)程中管壁與蛋白質(zhì)尤其是堿性蛋白質(zhì)會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的吸附，從而造成蛋白質(zhì)分離效率下降、峰對(duì)稱(chēng)性差、遷移時(shí)

2、間重現(xiàn)性差、蛋白質(zhì)回收率低等問(wèn)題。
　　 目前，為了抑制蛋白質(zhì)在毛細(xì)管壁的吸附，人們常采用的方法主要有極端pH值法、添加劑法、外加電場(chǎng)和聚合物涂層法等。極端pH法和添加劑法不利于分離選擇性，甚至?xí)鸬鞍踪|(zhì)變性；外加電場(chǎng)則受目前實(shí)驗(yàn)儀器條件的限制，且實(shí)驗(yàn)結(jié)果受焦耳熱影響；相較而言聚合物涂層法不僅高效而且穩(wěn)定，可以有效地解決這個(gè)問(wèn)題。毛細(xì)管涂層的形成大致可分為兩類(lèi)：共價(jià)鍵合和物理吸附。其中共價(jià)鍵合涂層穩(wěn)定性好但制備過(guò)程復(fù)雜且難以控

3、制；物理吸附涂層的制作簡(jiǎn)單且穩(wěn)定性較好，因而備受青睞。目前已用于物理吸附改性毛細(xì)管壁的聚合物主要有中性聚合物和陽(yáng)離子聚合物。其中有聚N，N-二二甲基丙烯酰胺(PDMA)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯亞胺(PEI)、聚羥乙基丙烯酰胺(PHEA)和聚壞氧乙烷(PEO)等。
　　 本文通過(guò)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(atom transfer radical polymerization，ATRP)方法合成了雙親水性三嵌段共聚物聚((N. N-

4、二甲基丙烯酰胺)-b-環(huán)氧乙烷-b-(N.N-二甲基丙烯酰胺))(PDMA-b-PEO-b-PDMA)，并將其作為物理涂層分離蛋白質(zhì)，取得了較好效果，主要研究工作如下：
　　 ⑴通過(guò)ATRP法合成了一組不同分子量的PDMA-b-PEO-b-PDMA三嵌段共聚物，并用核磁共振氫譜(1H NMR)對(duì)其結(jié)構(gòu)、凝膠滲透色譜(GPC)對(duì)其分子量及分子量分布進(jìn)行了表征。
　　 ⑵PDMA-b-PEO-b-PDMA中PEO鏈段和PDM

5、A鏈段均對(duì)毛細(xì)管具有涂覆作用，特別是相對(duì)疏水的PDMA鏈段，它可以使聚合物涂層的穩(wěn)定性大大增加。將PDMA-b-PEO-b-PDMA三嵌段共聚物用作物理涂層材料，研究了PDMA分子量、緩沖溶液pH值及共聚物結(jié)構(gòu)對(duì)堿性蛋白質(zhì)分離效率的影響，同時(shí)考察了該三嵌段共聚物對(duì)酸、堿、中性混合蛋白質(zhì)以及生物大分子的分離效果。
　　 ⑶測(cè)量了PDMA-b-PEO-b-PDMA三嵌段共聚物涂層管、PEO涂層管和空管的電滲流(EOF)，考察了pH值