康柏西普對(duì)兔眼小梁切除術(shù)后濾過(guò)通道瘢痕形成的影響.pdf

1、目的：
　　血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF）的受體能與抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子藥物康柏西普結(jié)合，使VEGF失去生物活性，從而對(duì)新生血管的生成和纖維組織的增生產(chǎn)生抑制作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究不同劑量的康柏西普對(duì)兔眼小梁切除術(shù)后濾過(guò)泡及眼壓的改變，來(lái)探討其抑制濾過(guò)道纖維瘢痕形成的效果，及其與絲裂霉素C（MMC）作用的比較，探討青光眼術(shù)后結(jié)膜下注射康柏西普能否能成為抗濾過(guò)道瘢痕形成

2、的新手段。
　　方法：
　　1.選擇健康成年大耳兔30只（60只眼），體重2.0－2.5kg，雌雄不限，測(cè)量基礎(chǔ)眼壓后行小梁切除術(shù)，成功制作兔眼抗青光眼手術(shù)動(dòng)物模型。30只兔（60只眼）隨機(jī)分為五組，且每只兔子雙眼所用藥物不同，并于術(shù)中兔耳處用標(biāo)記筆做標(biāo)記：第一組：6只兔右眼術(shù)畢后將0.1mL生理鹽水注射于結(jié)膜下，左眼于術(shù)中鞏膜瓣下放置浸有0.2g/L的絲裂霉素的棉片3分鐘，后用生理鹽水沖洗；第二組：6只兔右眼于術(shù)中鞏膜瓣下

3、放置浸有0.2g/L的絲裂霉素的棉片3分鐘，后用生理鹽水沖洗，左眼術(shù)畢后將0.025mL康柏西普于注射于結(jié)膜下；第三組：6只兔右眼術(shù)畢后將0.025mL康柏西普注射于結(jié)膜下，左眼術(shù)畢后將0.05mL康柏西普注射于結(jié)膜下；第四組：6只兔右眼術(shù)畢后將0.05mL康柏西普注射于結(jié)膜下，左眼術(shù)畢后將0.075mL康柏西普注射于結(jié)膜下；第五組：6只兔右眼術(shù)畢后將0.075mL康柏西普注射于結(jié)膜下，左眼術(shù)畢將0.1mL生理鹽水注射于結(jié)膜下。

4、　　2.術(shù)后在不同時(shí)間點(diǎn)觀察濾過(guò)道傷口的愈合及結(jié)膜的充血情況，眼前節(jié)相關(guān)反應(yīng)情況，包括角膜是否有水腫、前房深度及是否有炎性反應(yīng)、晶狀體透明度，觀察濾過(guò)泡在不同時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)，照相記錄，于不同時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)眼壓，并記錄。術(shù)后在不同時(shí)間點(diǎn)分批處死兔子（術(shù)后7天、15天、30天），每次每組隨機(jī)選取2只，共10只；將處死后的兔子完整取下眼球固定于4％甲醛固定液中24h，切取術(shù)區(qū)組織，包埋、切片后行伊紅、免疫組化及苦味酸-天狼星玫瑰紅染色。通過(guò)伊紅染色

5、可以觀察到術(shù)眼濾過(guò)通道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況，高倍鏡下（×200倍）進(jìn)行觀察、照相。經(jīng)過(guò)苦味酸-天狼星玫瑰紅染色的切片在偏振光顯微鏡下可以觀察到術(shù)區(qū)Ⅰ型和Ⅲ型膠原纖維（偏振光顯微鏡下Ⅰ型膠原纖維呈現(xiàn)出紅色或黃色雙折光，Ⅲ型呈現(xiàn)出藍(lán)綠色雙折光）。每張切片放置于高倍鏡下（×200倍），于術(shù)區(qū)組織處隨機(jī)選擇5個(gè)視野，應(yīng)用圖像分析軟件 Image-pro plus7.0，分析兔眼濾過(guò)通道術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)膠原纖維增生情況，以偏振光顯微鏡高倍鏡（×200）

6、下選取的視野中增生膠原纖維所占視野面積的百分比作為標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)免疫組化染色，可以觀察到術(shù)區(qū)不同時(shí)間點(diǎn)成纖維細(xì)胞的增生情況(標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒沉著者）。
　　結(jié)果：
　　1.由同一經(jīng)驗(yàn)豐富的青光眼手術(shù)醫(yī)生制作兔眼抗青光眼手術(shù)模型60只眼。試驗(yàn)結(jié)果顯示各組在術(shù)后眼前節(jié)變化情況（角膜、前房、晶狀體等相關(guān)情況）在相同時(shí)間點(diǎn)比較，各組間變化無(wú)明顯差異。術(shù)后7天內(nèi)，各試驗(yàn)組兔眼術(shù)區(qū)結(jié)膜都有不同程度的充血，濾過(guò)泡均隆起、彌散（功能性

7、濾泡），各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；7天后，生理鹽水組濾泡逐漸變小、扁平，直至術(shù)后30天，生理鹽水組術(shù)區(qū)濾泡逐漸包裹呈囊樣，瘢痕明顯，壁厚，血管豐富（非功能性濾泡）；7天后康柏西普0.025mL組濾泡變小、扁平，面積較前有縮小，但大部分為功能性濾泡；而康柏西普0.05mL組、康柏西普0.075mL組及MMC組均呈壁薄、隆起、彌散樣的功能性濾泡，術(shù)后30天康柏西普0.025mL組、康柏西普0.05mL組、康柏西普0.075

8、mL組分別與生理鹽水組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。術(shù)后第1天各組眼壓比術(shù)前明顯下降，與術(shù)前眼壓比較差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；術(shù)后15天后生理鹽水組眼壓逐漸升高，至術(shù)后30天，眼壓接近正常，與術(shù)前眼壓比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?？蛋匚髌?.025mL組在術(shù)后15天后眼壓逐漸升高，但較術(shù)前偏低；而康柏西普0.05mL組、康柏西普0.075mL組及MMC組眼壓仍保持穩(wěn)定、較

9、低水平；術(shù)后30天康柏西普0.05mL組、0.075mL組眼壓分別與康柏西普0.025mL組、生理鹽水組眼壓比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），康柏西普0.025mL組眼壓與生理鹽水組眼壓比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），康柏西普0.05mL組、康柏西普0.075mL組眼壓及 MMC組眼壓比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.術(shù)后于不同時(shí)間點(diǎn)分批處死兔子（分別于術(shù)后7天、15天、30天），完整取下眼球后固定，切取術(shù)

10、區(qū)組織包埋、切片、染色。（1）組織切片行伊紅染色后結(jié)果顯示：各組術(shù)后術(shù)區(qū)結(jié)膜下均可見(jiàn)有不同程度的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，主要包括有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞（淋巴細(xì)胞小而圓，核漿比很大，核濃染成深藍(lán)紫色；漿細(xì)胞胞漿略嗜堿，核染色深、偏位，大小介于淋巴細(xì)胞和巨噬/多核/巨細(xì)胞之間）。在生理鹽水組術(shù)區(qū)球結(jié)膜下有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，康柏西普各劑量組及 MMC組術(shù)區(qū)球結(jié)膜下組織結(jié)構(gòu)稀疏，可見(jiàn)有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。（2）組織切片行免疫組化染色后結(jié)果顯示：康柏西普0.05

11、mL組、康柏西普0.075mL組及MMC組濾過(guò)道的成纖維細(xì)胞數(shù)量在相同時(shí)間點(diǎn)比較要少于康柏西普0.025mL組?？蛋匚髌?.05mL組、康柏西普0.075mL組及MMC組濾過(guò)道合成在相同時(shí)間點(diǎn)合成的成纖維細(xì)胞數(shù)基本相同，在相同時(shí)間點(diǎn)比較，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。康柏西普0.05mL組分別與康柏西普0.025mL組及生理鹽水組濾過(guò)道的成纖維細(xì)胞生成數(shù)量，在相同時(shí)間點(diǎn)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；康柏西普0.025

12、mL組及生理鹽水組濾過(guò)道合成的成纖維細(xì)胞相同時(shí)間點(diǎn)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（3）切片組織行苦味酸-天狼星玫瑰紅染色結(jié)果顯示：各組術(shù)區(qū)組織增生的膠原纖維（Ⅰ型、Ⅲ型）隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，膠原纖維的含量逐漸增加，康柏西普0.05mL組、康柏西普0.075mL組及MMC組濾過(guò)道合成Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維含量相對(duì)稀少、規(guī)則，在相同時(shí)間點(diǎn)組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。康柏西普0.05mL組分別與康柏西普0.025mL組及生理

13、鹽水組濾過(guò)道合成的Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維相同時(shí)間點(diǎn)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；生理鹽水組濾過(guò)道合成的Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維相對(duì)致密、紊亂，與康柏西普各劑量組于相同時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.小梁切除術(shù)后采用濾過(guò)泡旁結(jié)膜下注射康柏西普的方法有助于減少濾過(guò)道新生血管形成，抑制濾過(guò)道瘢痕化，維持濾過(guò)泡的形態(tài)。
　　2.康柏西普對(duì)眼部組織無(wú)明顯毒副作用。
　　3.0.05mL、