蚯蚓纖溶酶組分抗原性、體內(nèi)代謝及原位定位的分析.pdf

1、蚯蚓纖溶酶是從不同種屬的蚯蚓中均可分離到的一種多組分的纖維蛋白水解酶，具有直接纖溶活性和纖溶酶原激活活性，既能溶解陳舊血栓又能抑制新血栓形成，實(shí)驗(yàn)表明該酶具有抗凝、溶纖、改善血液流變學(xué)性質(zhì)，可以口服，而且穩(wěn)定性好、纖溶活性強(qiáng)、藥理作用廣泛、副作用小，目前已廣泛用于臨床，是預(yù)防和治療血栓疾病的有效藥物。
　　 本文就蚯蚓纖溶酶組分的抗原性、體內(nèi)代謝及其在赤子愛勝蚓體內(nèi)的原位定位進(jìn)行了研究，為其生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)以及臨床應(yīng)用方面的

2、深入研究提供參考資料。主要從以下幾個方面進(jìn)行了研究：
　　 1.以熱變性蚯蚓纖溶酶組分EfP-0-2、EfP-Ⅰ-1、EfP-Ⅱ-1，以及重組蛋白EfP-Ⅲ-2為抗原免疫家兔獲得了抗血清，利用獲得的抗血清對部分組分的免疫學(xué)同一性進(jìn)行了驗(yàn)證。EfP-0、EfP-Ⅰ、EfP-Ⅱ的免疫雙擴(kuò)散反應(yīng)表明EfP-Ⅰ和EfP-Ⅱ具有部分免疫學(xué)同一性。利用DNAMAN軟件對獲得的EfP-0、EfP-Ⅰ、EfP-Ⅱ、EfP-Ⅲ的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行了初

3、步分析，包括整個序列相似性比對、氨基酸組成、蛋白酶消化、抗原肽、疏水性和親水性輪廓等，并對N端氨基酸序列進(jìn)行了分析，結(jié)果表明EfP-Ⅰ和EfP-Ⅱ具有部分免疫學(xué)同一性是由它們蛋白質(zhì)序列的組成和結(jié)構(gòu)決定的。
　　 2.利用獲得的蚯蚓纖溶酶組分的特異性抗體作探針和高度靈敏的ELISA來研究蚯蚓纖溶酶組分在消化道內(nèi)的吸收率和半衰期。由于蚯蚓纖溶酶的最適PH值近中性，而胃液的酸性較強(qiáng)，所以小鼠口服水溶性蚯蚓纖溶酶組分EfP-0-2、Ef

4、P-Ⅰ-1、EfP-Ⅱ-1和EFE，在胃液中會有一定的損失，血清中含量極低，只有180min檢測到有少量蚯蚓纖溶酶存在。與口服相比靜脈注射在生物體內(nèi)的利用率相對較高，小鼠靜脈注射蚯蚓纖溶酶組分EfP-0-2、EfP-Ⅰ-1、EfPⅡ-1和EFE，隨著時間的延長，它們在體內(nèi)的含量逐漸下降，但是單一組分比混合組分在體內(nèi)具有更長的半衰期，如果能將蚯蚓纖溶酶單一組分的純品制成靜脈注射用的針劑，那么就可以用來治療一些急性血栓病。
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5、.利用光鏡免疫組織化學(xué)技術(shù)，結(jié)合制備和保存的多克隆抗血清，對蚯蚓纖溶酶組分在赤子愛勝蚓體內(nèi)的原位定位，進(jìn)行了初步的探索。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蚯蚓纖溶酶組分定位和表達(dá)在圍繞生殖環(huán)的消化道上皮細(xì)胞，除了口部和后腸之外，位于前部的消化區(qū)域具有較高的酶活性。這個區(qū)域包括嗉囊、砂囊、胃和前部的腸，是重要的儲存和消化食物的器官。EfP-0主要分布在嗉囊、砂囊和前部的腸；EfP-Ⅰ是蚯蚓體內(nèi)含量最多的組分，主要分布在嗉囊、砂囊、胃和前部的腸；EfP-Ⅱ主要分布