苜蓿Ⅰ類chi、酸性glu的克隆和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化過(guò)程的超微結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文苜蓿Ⅰ類chi、酸性glu的克隆和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化過(guò)程的超微結(jié)構(gòu)研究姓名：戴怡齡申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：安黎哲20050601蘭州大學(xué)碩十學(xué)位論文4、采用三親交配法構(gòu)建含pBll21一chiAl2的農(nóng)桿菌工程菌株，葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化煙草外植體，得到58棵抗性植株，經(jīng)PCR檢測(cè)初步確定其中的39棵為陽(yáng)性轉(zhuǎn)皋因植株，進(jìn)一步利用SDS—PAGE電泳和減色法測(cè)定葉片中的幾丁質(zhì)酶活，了解導(dǎo)入的Chi基因在轉(zhuǎn)基因煙草中的

2、組成型表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)部分轉(zhuǎn)基因植株葉片的電泳條帶中出現(xiàn)35kDa大小的特異帶，可見(jiàn)轉(zhuǎn)基因植株相對(duì)于非轉(zhuǎn)基因植株其Chi表達(dá)程度和表達(dá)量都有明顯提高，顯示chiAl2在轉(zhuǎn)基因煙草中得到了活性表達(dá)。，5、建立辣椒遺傳轉(zhuǎn)化Km‘芽離體再生體系。組織培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)誘芽培養(yǎng)基為MS6一BA40mg／INAA05mg／IAgN032mg／1時(shí)子葉外植體的出芽率最高，因此選用MS6一BA40mg／INAA05mg／1AgN032mg／lKm50m鯽為辣椒遺

3、傳轉(zhuǎn)化的抗性芽分化培養(yǎng)基。6、對(duì)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)染辣椒共培養(yǎng)2d時(shí)和抗性篩選分化5d時(shí)的材料，經(jīng)常規(guī)方法制片和電子染色后，用TEM觀察農(nóng)桿菌細(xì)胞和予葉外植體細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化，結(jié)果顯示：T菌毛在多型態(tài)菌體內(nèi)裝配，具有雙層膜包繞的球形頭部，膜上直徑32～45rim的電子深染顆粒按79～87am的間距排列在兩層膜上；膜包繞的球形頭部?jī)?nèi)可見(jiàn)電子染色的細(xì)顆粒和細(xì)絲狀結(jié)構(gòu)。B菌毛具管狀的尾結(jié)構(gòu)，在T菌毛脫離菌體前，尾結(jié)構(gòu)的膜管上也可見(jiàn)有規(guī)律排列的電子深染