12份特異附子株系的綜合鑒定與評(píng)價(jià).pdf

1、附子為毛茛科植物烏頭（ Aconitum carmichaelii Debx.）的子根，有毒，味辛、甘，性大熱，具有回陽救逆，補(bǔ)火助陽，逐風(fēng)寒濕邪的功效，是著名四川道地藥材，在我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)應(yīng)用中有著不可替代的地位。長(zhǎng)期以來，附子栽培上是以“烏藥”進(jìn)行無性繁殖，這導(dǎo)致其多種變異類型的種源混雜種植現(xiàn)象嚴(yán)重，這將難以保證藥用附子在中醫(yī)藥臨床應(yīng)用中的用藥安全與用藥效果，因此選育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的附子品種，并對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)鑒定與評(píng)價(jià)非常有必要。
　　

2、本課題組前期已選育出12份農(nóng)藝性狀特異性較強(qiáng)的附子株系，本研究以江油附子主栽品種為對(duì)照，運(yùn)用生藥學(xué)鑒定法，薄層色譜法，高效液相色譜法，熱分析法和 AFLP分子標(biāo)記法對(duì)12份附子株系進(jìn)行綜合鑒定，并考察其農(nóng)藝性狀，最后根據(jù)農(nóng)藝性狀和質(zhì)量性狀進(jìn)行綜合比較評(píng)價(jià)，為12份附子株系的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。本論文主要研究結(jié)果如下：
　?。?）農(nóng)藝性狀考察：對(duì)照品種H7、H14的5個(gè)性狀（株高，莖鮮重，子根數(shù)，葉鮮重，子根鮮重）的測(cè)量值均

3、偏低。株系H1、H5的綜合農(nóng)藝性狀明顯優(yōu)于江油對(duì)照品種，同時(shí)還表現(xiàn)出較高出苗率和較低病死率。株系H9、H10的綜合農(nóng)藝性狀次之，有較低病死率，但出苗率表現(xiàn)偏低。其余株系綜合農(nóng)藝性狀和出苗率，病死率表現(xiàn)中等偏低水平。
　　（2）原植物形態(tài)特征：對(duì)照品種和參試株系的莖稈性狀均未表現(xiàn)出明顯差別，但葉片性狀則表現(xiàn)顯著差異。葉片形狀表現(xiàn)為掌狀三全裂或裂至基部，中央裂片3裂或5裂至中部，其小裂片有不同程度淺裂；兩側(cè)裂片2深裂近中部或基部，其內(nèi)

4、側(cè)與外側(cè)小裂片均有不同程度的分裂。所有小裂片呈楔形，邊緣均有缺刻，各裂片間密集或較稀疏。葉尖表現(xiàn)急尖，漸尖或鈍形。
　?。?）子根性狀：株系 H5和對(duì)照 H7的子根形狀規(guī)則，且綜合性狀表現(xiàn)優(yōu)良，具較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值；H11綜合子根性狀表現(xiàn)較差；其余株系的子根綜合性狀表現(xiàn)中等。株系 H9的子根呈不規(guī)則狀，但綜合性狀表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)。
　?。?）顯微結(jié)構(gòu)：對(duì)照品種和參試株系的葉片，莖，子根顯微結(jié)構(gòu)均表現(xiàn)相似，與烏頭屬植物的顯微特征相符。

5、
　?。?）薄層色譜指紋圖譜：對(duì)照品種和參試株系的薄層色譜圖呈現(xiàn)7個(gè)共有特征斑點(diǎn)，構(gòu)成附子的薄層色譜指紋圖譜。7個(gè)斑點(diǎn)顏色深淺不一，表明附子株系間存在顯著內(nèi)在質(zhì)量差異，根據(jù)該差異可達(dá)到初步鑒別的目的。
　?。?）生物堿含量及高效液相色譜指紋圖譜：對(duì)照品種 H7和 H14的雙酯型生物堿，單酯型生物堿，總生物堿含量均處于中等偏下水平。株系 H5、H8雙酯型生物堿優(yōu)勢(shì)明顯， H1單酯型生物堿優(yōu)勢(shì)明顯， H1、H2總生物堿優(yōu)勢(shì)明顯，

6、其余株系各項(xiàng)生物堿含量表現(xiàn)中等或偏低。對(duì)照品種和參試株系的高效液相色譜圖可作為其特征指紋圖譜，可用于附子株系間鑒定。
　　（7）熱分析指紋圖譜：對(duì)照品種和參試株系的子根樣品在升溫過程中均表現(xiàn)出2次大的失重過程，分別為水分脫附過程和燃燒過程。DSC曲線放熱峰峰形的有無及峰溫呈現(xiàn)出顯著差異，該差異可以用于附子株系間的鑒別。對(duì)照品種和參試株系的熱分析圖可作為其特征指紋圖譜，可用于附子株系及種質(zhì)資源間的鑒定。
　?。?） AFLP分

7、子標(biāo)記：用對(duì)照品種和參試株系的嫩葉提取 DNA基因組，9對(duì)隨機(jī)選擇性引物進(jìn)行 AFLP分析，共擴(kuò)增出250條清晰條帶，其中多態(tài)性條帶209條，多態(tài)位點(diǎn)比例在61.2％~84.4%之間，總多態(tài)位點(diǎn)比率為87.3%。對(duì)照品種和參試株系之間存在較豐富的遺傳變異，株系 H8的遺傳多樣性最高， H13的遺傳多樣性最低。相同選擇性引物對(duì)的條件下，AFLP聚丙烯酰胺銀染圖可以用于對(duì)照品種和參試株系的鑒定。
　?。?）綜合評(píng)價(jià)：運(yùn)用 DTOPSI