磷脂酰絲氨酸(PS)抗H-,2-O-,2-引發(fā)的鼠腦功能障礙和海馬神經(jīng)元凋亡的研究.pdf

1、氧化是造成腦功能障礙，記憶力降低和形成老年性癡呆的誘因之一。磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）具有增加記憶、抗老年性癡呆的作用。PS是通過抗氧化發(fā)揮其作用的嗎?本論文以動物腦和海馬神經(jīng)元為實驗材料驗證PS的抗氧化作用。 1、動物腦組織中PS的薄層分離測定 以（VC氯仿）：V（無水乙醇）：V（三乙胺）：V（水）＝10：11.3：11.7：2.7為展開劑，以0.3％的溴百里香酚水溶液（P≥7）作為顯色

2、劑，對四種動物（牛、羊、雞、魚）腦組織中磷脂成分進(jìn)行了薄層層析分離和掃描定量，每100g磷脂中PS的含量分別是20.5g，19.3g，18.7g，17.0g該法分離，顯色效果好。 2、動物腦PS的提取、分離、純化 采用有機溶劑萃取法，用9-12倍量的丙酮去除腦中95％的膽固醇，采用乙醚（或正已烷）從腦中提取99％的總磷脂，按乙醚液：Na2CO3溶液（PH=10）=1：1～4，攪拌均勻，二次冷凍，二次靜置分層，底層的黃色溶

3、液即為PS，經(jīng)薄層分析檢驗知為單一成分。 3、動物腦PS的脂肪酸種類分析 對上述四種動物腦提取的PS分別進(jìn)行甲酯化、然后用GLC分析，結(jié)果：冷凍干燥原料提取的PS比烘干腦原料提取的PS含更多的不飽和脂肪酸，四種動物腦均含有飽和脂肪酸（14：0，18：0），單不飽和脂肪酸（16：1，18：1），n—3多不飽和脂肪酸（18：3n，20：5n，22：5n，22：6n）和n—6多不飽和脂肪酸（18：2n，20：2n，20：3n，

4、20：9n，22：4n，22：5n），而以魚腦中多不飽和脂肪酸為最高達(dá)52.24。 4、PS抗H2O2引發(fā)的鼠腦功能障礙 有關(guān)記憶和腦功能障礙的研究人們普遍接受Morris（1984）的水迷宮實驗。以Wistar雄性幼鼠為實驗動物，動物分為8組：空白對照（A）組；15mg H2O2/kg/次/天（B）組，30 mg H2O2/kg/次/天（C）組，和30 mg PS/kg/次/天（D）組。和二個組先分別給15 mg H2

5、O2/kg/次/天（E）組，30 mg H2O2/kg/次/天（F）組，6h后依次分別給同量的PS。另二個組先給15 mg PS/kg/次/天（G）組和30mg PS/kg/天（H）組，6h后依次分別給同量的H2O2，H2O2和PS稀釋成0.3ml左右，腹腔注射，實驗結(jié)果如下： ①D和A組相比，D組游泳時間最短（P<0.05），距離最短（P<0.05）。B、C和A組相比，B、C組游泳時間最長（P<0.01）游泳距離最長（P<0.

6、01）E、F、G、H各組和A組相比，游泳時間較長，距離較長（P<0.01）。 ②HE染色后觀察海馬細(xì)胞。根據(jù)Satoru，等（1999）的死亡細(xì)胞分級（％）級別，A、D組為1級，B、E、F、H各組為2級，C組為3級。 ③鼠腦中成分的變化（1）脂褐素含量（u/g組織）A組219.2±7.5，C組422.6±87.2，B、E、F、G、H組脂褐素含量在249.8±82.5和343.6±72.3之間。而D組為93.7±38.5，

7、表明了H2O2的氧化作用和PS的抗氧化作用。（2） MAO—B活化，A組為45，C組為100，D組為35。B、E、F、G、H各組在29—72之間，表明H2O2能引起腦單胺氧化酶升高，PS能降低單胺氧化酶的活性。（3） Ach含量。A組為14.3±3.22，C組為8.76±1.88，D組為17.89±3.71。B、E、F、G、H各組Ach在11.56±2.13到14.3+3.22之間。表明H2O2能降低Ach含量，PS能升高Ach含量。

8、 5、PS抗H2O2引發(fā)的鼠海馬神經(jīng)元凋亡 新生大鼠（24h內(nèi)）的海馬神經(jīng)元，加入1.5、15，150mg/L的PS預(yù)保護(hù)細(xì)胞24h后以10—2g/L H2O2刺激24h取樣測定細(xì)胞凋亡率。 分別為27.17±2.05，16.17±2.21和37.17±2.45。表明了PS的抗凋亡作用。 用Confocal測細(xì)胞內(nèi)Ca++濃度，分別為4.03±1.24，24.50±2.12和—（15±3.02）表明PS影響