Ras相關(guān)區(qū)域家族10在胃癌中的表達(dá)及與胃癌患者預(yù)后相關(guān)的臨床病理學(xué)研究.pdf

1、背景:Ras相關(guān)區(qū)域家族10(RASSF10)已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤中作為抑癌基因而異常表達(dá)，并且表達(dá)異常的RASSF10與腫瘤的惡性程度及其患者的臨床轉(zhuǎn)歸及預(yù)后密切相關(guān)。在胃癌中，RASSF10的表達(dá)情況和作用機(jī)制尚不清楚。
　　目的:本研究旨在探討RASSF10基因在人類胃癌中的表達(dá)及與胃癌患者預(yù)后相關(guān)的臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系，為胃癌的臨床診治提供客觀依據(jù)。
　　方法:選取2008年1月至2010年12月在第二軍醫(yī)大學(xué)附

2、屬長(zhǎng)征醫(yī)院胃癌手術(shù)標(biāo)本共105例。所有患者臨床隨訪時(shí)間至少五年或隨訪至死亡。另取我院2015年3月至2015年6月胃癌組織標(biāo)本及相對(duì)應(yīng)癌旁組織標(biāo)本各15例，于手術(shù)切除后切取一定大小立刻在液氮中進(jìn)行速凍，并保持在-80℃冰箱中行Western blot和qRT-PCR分析。應(yīng)用Western blot、qRT-PCR、免疫組織化學(xué)等方法檢測(cè)RASSF10在胃癌組織和相應(yīng)癌旁正常組織中的表達(dá)情況，并分析其在胃癌不同TNM分期中的表達(dá)特點(diǎn)，及

3、其與臨床病理學(xué)參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用Western blot、qRT-PCR的方法檢測(cè)多株胃癌細(xì)胞株和永生化胃上皮細(xì)胞GES1細(xì)胞中RASSF10的表達(dá)情況。利用去甲基化試劑5-雜氮-2'-脫氧胞苷（5-aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-dC）處理所選取的與GES1細(xì)胞相比表達(dá)差異最明顯的BGC-823細(xì)胞系，通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力，通過(guò)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)胃癌細(xì)胞的增殖能力和活力。最后，

4、運(yùn)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:在15例冰凍胃癌組織和相對(duì)應(yīng)癌旁組織中，qRT-PCR結(jié)果顯示RASSF10在胃癌組織中的表達(dá)與相匹配的癌旁正常組織相比顯著下降。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了qRT-PCR的結(jié)果，RASSF10在胃癌組織中的表達(dá)水平的確低于相配對(duì)的癌旁正常組織。并且隨著臨床TNM分期的進(jìn)展，Ⅲ、Ⅳ期胃

5、癌患者中該基因表達(dá)水平與Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者相比，呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示在所選取的105例胃癌組織中RASSF10陽(yáng)性表達(dá)率為38.1％(40/105)，陰性表達(dá)率為61.9％(65/105)，在所選取的癌旁正常組織中RASSF10的陽(yáng)性表達(dá)率為61.9％(65/105)，陰性表達(dá)率為38.1％(40/105)，兩者差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，RASSF10表達(dá)水平與腫瘤大小、腫瘤分型、分化

6、程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度有關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（所有p＜0.05）;RASSF10的表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤部位等差別無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（所有p＞0.05）。通過(guò)Kaplan-Meier生存分析顯示RASSF10表達(dá)陰性患者有著更差的預(yù)后(p=0.008)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析顯示:RASSF10表達(dá)(HR=0.528，95％CI:0.286-0.975，p=0.041)與AJCC臨床分期(HR=4.994，95％CI

7、:1.998-12.486，p=0.001)可作為判斷胃癌預(yù)后的獨(dú)立的預(yù)后因子。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，RASSF10在多株胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平均低于正常胃上皮細(xì)胞GES1細(xì)胞。5-Aza-dC處理BGC-823細(xì)胞后，RASSF10的表達(dá)水平升高。細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，去甲基化試劑處理組細(xì)胞的克隆數(shù)較未處理組克隆數(shù)明顯減少。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示處理組的細(xì)胞從周邊遷移到中央的細(xì)胞數(shù)明顯減少，遷移距離明顯縮短。
　　結(jié)論:RAS

8、SF10蛋白在胃癌組織中較相應(yīng)癌旁組織表達(dá)明顯下調(diào)，并且隨著臨床分期及病理分期的進(jìn)展，RASSF10的表達(dá)水平下調(diào)更加明顯。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，其表達(dá)水平的高低與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)密切相關(guān)，且其在胃癌中表達(dá)下降可預(yù)測(cè)不良預(yù)后。這提示我們RASSF10或許可以作為胃癌診斷與預(yù)后的潛在生物標(biāo)記物。在體外機(jī)制研究中，我們發(fā)現(xiàn)RASSF10在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平較GES1細(xì)胞表達(dá)下降，BGC-823細(xì)胞系中下降更加明顯。去甲基化試劑處理后，RAS