乳酸菌冷凍干燥生理?yè)p傷的研究.pdf

1、冷凍干燥乳酸菌發(fā)酵劑的研究成為近年來(lái)相關(guān)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，較之前使用的液態(tài)發(fā)酵劑而言，它具有用量小、運(yùn)輸儲(chǔ)存方便、可以直接投入生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。我國(guó)國(guó)內(nèi)關(guān)于乳酸菌冷凍干燥的研究主要集中在遴選有效的冷凍干燥保護(hù)劑上，涉及到細(xì)胞生理水平上的乳酸菌冷凍干燥研究則相對(duì)較少。
　　 以德氏乳桿菌保加利亞亞種為研究對(duì)象，本論文主要研究乳酸菌細(xì)胞膜在凍干過(guò)程中通透性的變化、胞內(nèi)重要酶失活及蛋白質(zhì)、核酸泄漏的情況
　　 通過(guò)熒光探針?lè)?BCEC

2、F)研究?jī)龈汕昂蠹?xì)胞內(nèi)外△pH的變化情況，說(shuō)明在凍干過(guò)程中，細(xì)胞膜對(duì)H+的通透性發(fā)生了變化，維持正常生理代謝水平的細(xì)胞內(nèi)外△pH受到了損失。
　　 利用Fluo-3/AM作為Ca2+熒光探針，可以精確檢測(cè)凍干處理前后乳酸菌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的變化。通過(guò)熒光分析方法研究?jī)龈商幚砬昂蠹?xì)胞膜通透性的變化，結(jié)果表明凍干后的細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，正常菌體胞內(nèi)鈣離子濃度僅為凍干菌體的22.4%。另外，添加海藻糖作

3、保護(hù)劑的菌體在凍干后細(xì)胞膜的通透性變化較少，說(shuō)明保護(hù)劑能夠有效的減少冷凍干燥過(guò)程對(duì)細(xì)胞膜的損傷。
　　 通過(guò)研究?jī)龈汕昂缶w離心后上清液中蛋白質(zhì)和核酸的變化情況，得出凍干前后乳酸菌細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和核酸都有不同程度的泄漏，添加海藻糖的菌體細(xì)胞上清液中二者熒光信號(hào)明顯低于不加保護(hù)劑的。
　　 凍干前后，胞內(nèi)的酶也受到了影響。通過(guò)對(duì)乳酸菌菌體內(nèi)重要的兩種酶(β-半乳糖苷酶和乳酸脫氫酶)的研究，得出細(xì)胞內(nèi)的β-半乳糖苷酶和乳酸脫

4、氫酶在凍干過(guò)程中都發(fā)生了泄漏。而保護(hù)劑能夠有效的避免兩種酶的泄漏。同時(shí)，胞內(nèi)的酶在凍干過(guò)程中酶活也要降低。
　　 冷凍干燥前菌體狀態(tài)也是影響凍干對(duì)細(xì)胞生理?yè)p傷及存活率和菌體活力的重要因素。通過(guò)研究菌體在離心后放到不同pH環(huán)境中孵育一定時(shí)間，發(fā)現(xiàn)菌體經(jīng)保護(hù)劑懸浮后，在pH6.0的環(huán)境中孵育1小時(shí)，能夠有效地提高菌體凍干后的存活率和活性。懸浮后經(jīng)過(guò)10℃冷激60分鐘的菌體細(xì)胞凍干后的存活率和活力較對(duì)照組也有明顯的提高。預(yù)凍時(shí)間對(duì)凍干