子宮性不孕相關(guān)兔宮腔粘連模型及人離體子宮灌注研究.pdf

1、第一章電熱損傷法建立新西蘭大白兔宮腔粘連模型
　　目的:宮腔粘連(Intrauterine adhesions，IUAs)指因?yàn)楦鞣N因素造成子宮內(nèi)膜基底層損傷，在創(chuàng)傷愈合過程中，子宮內(nèi)膜表面出現(xiàn)局部瘢痕或形成粘連帶粘連在一起，造成宮腔部分或完全閉塞，臨床表現(xiàn)為月經(jīng)失調(diào)、盆腔痛等，嚴(yán)重者可能導(dǎo)致閉經(jīng)、不孕、自發(fā)性流產(chǎn)等結(jié)果，對女性生育功能有著重大的影響，是導(dǎo)致女性不孕的重要因素。然而目前其發(fā)病機(jī)制及治療方法仍未明確和統(tǒng)一，因此建立一

2、個(gè)穩(wěn)定有效的宮腔粘連動(dòng)物模型，則成為開展相關(guān)研究的前提和基礎(chǔ)。本文旨在利用機(jī)械損傷和電熱損傷法構(gòu)建兔IUA模型，觀察比較兩種方法的建模效果。
　　方法:42只成年雌性新西蘭大白兔隨機(jī)分為機(jī)械損傷組和電熱損傷組，每組21只。兩組分別以機(jī)械刮宮和醫(yī)用多功能高頻電刀電灼損傷兔一側(cè)子宮內(nèi)膜模擬宮腔粘連形成，以另一側(cè)子宮作為自身對照，分別比較損傷側(cè)和對照側(cè)子宮病理變化、腺體數(shù)量、纖維化面積及胚胎個(gè)數(shù)，評估兩種方法建模效果及造成的子宮內(nèi)膜損傷

3、對兔生育力的影響。其中機(jī)械損傷組兔的損傷側(cè)子宮為M-A組，對照側(cè)子宮為M-B組;電熱損傷組兔的損傷側(cè)子宮為E-A組，對照側(cè)子宮為E-B組。分別在損傷后7d、14d和28d收集兔雙側(cè)子宮組織，行HE和Massoon染色觀察兩側(cè)子宮內(nèi)膜病理改變，并對兩側(cè)子宮內(nèi)膜的腺體個(gè)數(shù)和內(nèi)膜纖維化面積比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和比較。另外將損傷后7d的雌兔與成年雄兔合籠，14天后觀察比較兩側(cè)子宮胚胎個(gè)數(shù)。
　　結(jié)果:兩種建模方法均未見明顯纖維粘連帶形成。病理

4、組織學(xué)觀察顯示機(jī)械損傷組術(shù)后7d，M-A組損傷內(nèi)膜腺體數(shù)量較B組減少，間質(zhì)水腫、白細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管充血、阻塞，可見少量新生毛細(xì)血管;術(shù)后14d和30d，M-A組和M-B組子宮內(nèi)膜切片HE染色鏡下顯示并沒有明顯的差異，損傷后的子宮內(nèi)膜已完全修復(fù)。電熱損傷組建模術(shù)后7d，與E-B組相比，E-A組宮腔皺襞減少，表面稍平坦，基本被柱狀上皮細(xì)胞覆蓋，腺體數(shù)量明顯減少，間質(zhì)水腫、白細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管充血、阻塞，可見少量新生毛細(xì)血管;術(shù)后14d，E

5、-A組宮腔表面皺襞仍少，表面較平坦，上皮基本全部被柱狀上皮細(xì)胞覆蓋，腺體個(gè)數(shù)仍較少，間質(zhì)水腫不再明顯，可見少量白細(xì)胞浸潤，新生毛細(xì)血管增多;術(shù)后28d，E-A組子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)基本恢復(fù)正常，可見較多新生腺體，未見間質(zhì)充血和淋巴細(xì)胞浸潤。
　　機(jī)械組損傷后7d，M-A組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量較M-B組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);機(jī)械損傷后14d、30d，M-A組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量與M-B組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。電熱損傷后7d和14

6、d，E-A組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量較E-B組減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而電熱損傷后30d E-A組子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量與E-B組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　機(jī)械損傷后7d，M-A組內(nèi)膜纖維化面積比與M-B組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;電熱損傷后7d，E-A組內(nèi)膜纖維化面積比較E-B組增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　M-A組子宮胚胎個(gè)數(shù)與M-B組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;E-A組子宮胚胎個(gè)數(shù)較E-B組減少，差異有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:利用機(jī)械損傷法很難建立穩(wěn)定有效的兔宮腔粘連模型。盡管未見明顯纖維粘連帶形成，電熱損傷造成的胚胎個(gè)數(shù)的減少說明采用電熱損傷法建立的兔宮腔粘連模型在損傷后7-14天是穩(wěn)定有效的。
　　第二章人離體子宮冷灌注及冷缺血保存的安全區(qū)間
　　目的:離體子宮保存是子宮移植過程中需要解決的一項(xiàng)關(guān)鍵問題，良好科學(xué)的子宮灌注和保存方法是保證子宮移植成功的重要前提。本文旨在探討人離體子宮利用組氨酸-色氨酸

8、-酮戊二酸鹽(Histidine-tryptophane-ketoglutarate，HTK)液冷灌注及冷缺血保存的安全區(qū)間，為子宮移植的相關(guān)研究及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和參考。
　　方法:樣本為人離體子宮7例，來源于行子宮切除術(shù)的宮頸癌患者。其中3例用HTK液在低溫條件下經(jīng)子宮動(dòng)脈灌注，測量并記錄一定灌注壓力所對應(yīng)的灌注高度，建立灌注高度與灌注壓之間的數(shù)學(xué)關(guān)系模型;4例在適當(dāng)灌注高度下進(jìn)行短時(shí)間冷灌注，然后立刻取子宮內(nèi)膜及肌組織分

9、別于HTK保存液和生理鹽水(normal saline，NS)中保存，兩組又根據(jù)保存時(shí)問(0、3、6、24h)的不同分為0h組、HTK3h組、HTK6h組、HTK24h組、NS3h組、NS6h組和NS24h組，利用光學(xué)和電子顯微鏡觀察各組子宮組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，測定并比較各組子宮平滑肌收縮能力，分析離體子宮短時(shí)灌注后冷缺血保存的最佳時(shí)限。
　　結(jié)果:灌注壓90～140mmHg對應(yīng)的灌注高度為62～122cm，理論灌注高度H與灌注壓

10、P關(guān)系公式為H(m)=(128μl1/πd14·n·Δv/60+128μl2/πd24·n·Δv/60+133·P）/(pg)-0.470。與0h組比較，HTK3h組和HTK6h組的子宮組織在光學(xué)和電子顯微鏡下形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)均未見明顯改變，但HTK24h組及所有的NS組的子宮組織均出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞水腫、細(xì)胞間失去聯(lián)系、線粒體腫脹及染色質(zhì)粗染等不可逆的退行性改變;HTK3h、HTK6h和HTK24h三組子宮肌組織的肌收縮力差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

11、P=0.772);而與相同時(shí)段HTK組標(biāo)本相比，NS3h、6h和24h組子宮肌組織的肌收縮力均明顯降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:人類離體子宮組織在低溫環(huán)境下利用HTK液灌注的安全高度是62～122cm，理論灌注高度H與灌注壓P關(guān)系模型公式為H(m)=(128μl1/πd14·n·Δv/60+128μl2/πd24·n·Δv/60+133·P)/(ρg)-0.470。人離體子宮短時(shí)灌注后于4℃ HTK液中保存可耐受冷缺血時(shí)間至少