紅藤貞芪扶正顆粒對(duì)5-FU化療大腸癌小鼠空腸損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:建立HPLC分析方法，構(gòu)建紅藤貞芪扶正顆粒(HT185)HPLC指紋圖譜，分析不同批次HT185的HPLC指紋圖譜，評(píng)價(jià)HT185藥物質(zhì)量的可控性;通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，研究HT185對(duì)5-氟尿嘧啶(5-FU)化療大腸癌小鼠所致空腸損傷的保護(hù)作用研究，為HT185進(jìn)一步的藥物研發(fā)、臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:通過(guò)HPLC分析方法構(gòu)建HT185的HPLC指紋圖譜，測(cè)定HT185不同批次指紋圖譜，運(yùn)用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)

2、對(duì)不同批次HT185的HPLC色譜圖進(jìn)行相似度計(jì)算，評(píng)價(jià)不同批次HT185的質(zhì)量。
　　體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的鼠源性結(jié)腸癌CT-26細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，臺(tái)盼藍(lán)染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，細(xì)胞數(shù)量以2×106/mL密度與基質(zhì)膠按等比例混合后，采取皮下接種法將CT-26細(xì)胞接種于BABL/c小鼠右前腋窩下，建立大腸癌皮下移植瘤動(dòng)物模型。通過(guò)瘤體體積公式計(jì)算，待瘤體體積長(zhǎng)至100-150mm3時(shí)按瘤體體積的大小將小鼠隨機(jī)均分為4組，

3、包括對(duì)照組、HT185組、5-FU組、5-FU+HT185組，每組10只。并分別用5-FU（100 mg/kg）和HT185(12.4g/kg)進(jìn)行干預(yù)。其中，5-FU分別在分組當(dāng)天和之后每隔一周進(jìn)行腹腔注射1次，共3次;HT185于分組當(dāng)天進(jìn)行灌胃，1次/天，連續(xù)給藥18天。對(duì)照組和HT185組分別給予灌胃和腹腔注射方式等容積的生理鹽水。每天稱(chēng)量各組小鼠的體重，并做好記錄。每天觀察各組小鼠的腹瀉情況，根據(jù)腹瀉評(píng)分指數(shù)進(jìn)行評(píng)分比較。于第

4、19天采用頸椎脫臼法處死小鼠，分離空腸組織，用4％多聚甲醛固定，石蠟包埋，切4μm厚度制作石蠟切片。隨后，采用蘇木素-伊紅染色法觀察HT185對(duì)空腸組織病理形態(tài)學(xué)改變的影響，并根據(jù)Macpherson and Pfeiffer腸組織病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)小鼠空腸組織病理形態(tài)學(xué)的改變進(jìn)行分級(jí);采用TUNEL法檢測(cè)HT185對(duì)5-FU引起的腸道細(xì)胞凋亡的影響;采用免疫組織化學(xué)染色法(IHC)檢測(cè)HT185對(duì)空腸腺隱窩細(xì)胞中Bcl-2和Bax在蛋白

5、水平表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:1.建立了HT185指紋圖譜，對(duì)不同批次HT185進(jìn)行HPLC指紋圖譜分析相似度較高，藥物成分穩(wěn)定，HT185藥物質(zhì)量可控。
　　2.與對(duì)照組和HT185藥物組相比，5-FU組小鼠的體重下降明顯，且大多數(shù)在注射5-FU后的第三天出現(xiàn)腹瀉癥狀;石蠟組織病理切片可以明顯的觀察到不同程度的腸道黏膜損傷，如腸絨毛排列不整齊、斷裂，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腸上皮細(xì)胞、固有層水腫等;TUNEL實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)鏡下觀察空腸腺

6、隱窩細(xì)胞發(fā)生大量凋亡（P＜0.05）;免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示空腸腺隱窩細(xì)胞中Bcl-2的表達(dá)顯著下降(P＜0.05)，Bax的表達(dá)明顯升高（P＜0.05）;與5-FU組相比，5-FU+HT185對(duì)小鼠的體重減輕的狀況無(wú)明顯改善作用（P＞0.05），但能夠明顯降低腹瀉發(fā)生率(P＜0.05)，空腸組織黏膜損傷程度減輕;空腸腺隱窩細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯減少(P＜0.05)，Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯升高，Bax蛋白的表達(dá)明顯下降(P＜0.05)

7、。
　　3.對(duì)照組與HT185比較，小鼠平均體重、空腸組織黏膜損傷程度、空腸腺隱窩細(xì)胞凋亡情況均無(wú)顯著性差異（P＞0.05），無(wú)腹瀉癥狀出現(xiàn)（P＞0.05）。
　　結(jié)論:1.建立HT185指紋圖譜，對(duì)不同批次HT185的HPLC指紋圖譜分析，經(jīng)過(guò)相似度的計(jì)算，HT185質(zhì)量可控。
　　2.HT185對(duì)5-FU誘導(dǎo)的空腸損傷具有保護(hù)作用，能夠顯著的改善小鼠腹瀉狀況、減輕空腸組織黏膜損傷程度。
　　3.HT185可以